详解：色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

色谱柱预防性保护与柱寿命的延长

通常，一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好，但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和基它问题的因素很多，而有些因素是操作者很难控制的，如果被分析的样品（如分析生物样品），怎么净化样品也是“脏”的，对于色谱的柱影响是非常大的。然而采取下列措施后，在多数情况下总能够大为地减少柱上故障，达到延长柱寿命的目的。图1给出了进样达近13000次的色谱柱分离图。

图 1 进样达近 12749 次进样谱图

（a）第78次进样谱图；（b）第12749次进样谱图

用溶剂溶解的样品，多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来，不会造成危害。有些样品可能含有橄粒物质，样品中的某种组分（如蛋白质）在柱头上沉积下来，组分在固定相上保留很强，溶剂带走柱填料，等等，这些都会造成柱效能下降或对往寿命的影响；有必要采取措施防止柱变坏。

如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色，进样前必须要过滤。虽然流路上装有过涟器和保护柱，但不能代替样品的前处理，样品中过多的微粒会使过泌器和保护柱超载，很快阻塞，或者微粒进入分析柱，所以在进样前必须过滤样品。

若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞，应先试验一下，看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小，表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件，包括换样品溶剂和流动相．或处理样品去掉不溶物质。应尽 t 用小体积的样品。

有些样品能很强地吸附在柱填料上，这样会降低塔板数，改变样品的保留时间、峰形，并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外，还要加保护柱，定期清洗色谱柱。有时因为疏忽，用对柱有吝的溶剂溶解样品，比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品,这样的样品只要进50-100μL到硅胶基质柱中，硅胶就很快溶解而使柱报废．在这种情况下，应立即中和样品，或除去原溶剂中的有害成分。

5．用强溶剂定期冲洗柱

每次工作结束．用强溶剂冲洗柱是良好的习惯，可用甲醇、乙腈冲反相柱，冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇／水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。

柱头的烧结不锈钢论片，要求平整， 死体积小，孔径适当（2-5μm）。过建片选择不好会改变色谱峰形．增加阻力或起不到阻挡污染物的作用（填料很快变色）。

此外，对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点： ① 接头耍配套，用同一厂商的组接件； ② 接头之间、柱压帽螺母与密封卡套之间无微粒（填料），否则收紧时容易咬死；③ 密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动，所以拆开柱头再上紧时要小心，不能使卡套移动．原来柱端的不锈钢论片和垫片的厚度和强度也不能改变（改变这些附件的性能就促使卡套移动。）； ④ 接头等组接件不耍拧得过紧．适当上紧后接上泵试验，分步拧紧，直到不润为止，还有非常里要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。