蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法验证

高秋荣

2018/07/28
国联质检团队

私聊

液相色谱（LC）

蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法验证报告

GB/T 18932.18-2003（液相色谱-紫外检测法）

张霞

一、方法概述
1.范围
GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中羟甲基糠醛含量的液相色测定方法。
本部分适用于蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定。
本部分的方法检出限：1.0mg/kg。
2.规范性引用文件
下列文件中的条款通过GB/T 18932的本部分的引用而成为本部分的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。
GB/T 6379 测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性（GB/T 6379-1986,neq ISO 5725：1981）。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-1992,neq ISO 3696：1987）。
3.原理
蜂蜜样品中的羟甲基糠醛经HPLC反相色谱柱分离，用液相色谱仪紫外检测器检测。用标准曲线外标法定量。
二、仪器与试剂
1. 仪器
1.1高效液相色谱仪：配紫外检测器,仪器编号：UNQD-YQ-131。
1.2 分析天平：感量为0.01g。
1.3注射器：10mL。
1.4过滤膜：0.45μm。
以上仪器符合国标要求。
2. 试剂及其配制
2.1水：GB/T 6682规定的一级水。
2.2甲醇：色谱纯。
2.3 甲醇溶液：10%，吸取100mL的甲醇到1000mL的容量瓶中，用水稀释至刻度。
2.4羟甲基糠醛标准品来源：上海安谱货号：CDAA-281538
三、试样的制备与保存
无论有无结晶的实验室样品，都不要加热。将其搅拌均匀，分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。将试样于室温下保存。
四、分析步骤
1、标准曲线绘制
1.1 标准储备液的配制（200.0μg/mL）：准确称取0.0200g（准确至0.0001g）的羟
甲基糠醛标准物质于100mL容量瓶，用10mL甲醇溶解，用水稀释至刻度。
1.2标准工作液的配制：
分别吸取适量羟甲基糠醛标准储备液于100mL容量瓶中，用10%甲醇溶液稀释至刻度，配制成浓度为0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.6μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、10.0μg/mL系列工作液，现配现用。
2、样品的处理
称取10g试样（精确至0.01g），置于100mL烧杯中，加入10mL甲醇，用玻
璃棒轻轻搅拌均匀，使试样完全溶解。转移至100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，充分混匀。用0.45μm的滤膜过滤，滤液用于液相色谱仪紫外检测器测定。
3.仪器测定条件
3.1色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm或相当者。
3.2流动相：甲醇+水（10+90）。
3.3流速：1.0mL/min。
3.4检测波长：285nm。
3.5进样体积：10μL。
3.6柱温：30℃。
五、结果处理
试样羟甲基糠醛含量按下式进行计算：

式中:X-试样中羟甲基糠醛的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）;
C-从标准工作曲线上得到的被测组分溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）;
m-试样质量,单位为克(g);
V-试样的定容体积,单位为毫升(mL)。
1000-换算系数。
六、验证结果
1.线性结果
将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
同时做空白实验。
羟甲基糠醛Y=74561.5*X+373.701 R^2=0.9998461

以上结果表明羟甲基糠醛在0.1μg/mL～10.0μg/mL范围内，R^{^2}=0.9998461，羟甲基糠醛浓度和峰面积呈线性关系，线性良好，符合要求。
2.检出限结果
将1.0μg/mL标准溶液逐级稀释至S/N=3±1，得出羟甲基糠醛的方法检出限为0.5mg/kg，此检出限结果小于国标GB/T 18932.18-2003的方法检出限1.0mg/kg，故此方法满足条件。
六、方法精密度（重复性）
对LBF180700307样品分别进行6次加标重复性的测定，测定结果如下：

测定编号	1	2	3	4	5	6
质量（g）	10.0007	10.0013	10.0489	10.0301	10.0292	10.0204
浓度（μg/mL）	2.182	2.184	2.183	2.184	2.183	2.183
含量（mg/kg）	21.8	21.8	21.7	21.8	21.8	21.8
平均值（mg/kg）	21.8
RSD%	0.187

本方法的精密度为0.187%，符合GB/T 18932.18-2003中给出试样测试结果的精密度要求。因此，本次测定均符合要求。
七、准确度验证（加标回收）
对LBF180700307样品加标，取200.0μg/mL的标液0.10mL、0.50mL、1.00mL同样品同步处理后，结果见下表：

测定编号		羟甲基糠醛
序号	m（g）	V（mL）	C（μg/mL）	羟甲基糠醛含量（mg/kg）	平均值（mg/kg）	加标量（mg/kg）	回收率%
1#	10.0499	100.0	0.095	0.9453	0.928	/	/
2#	10.0004	100.0	0.091	0.9100	0.928	/	/
加标1#	10.0012	100.0	0.302	3.02	3.02	2.00	104.6
加标2#	10.0251	100.0	1.094	10.9	10.9	9.99	99.8
加标3#	10.0377	100.0	2.102	20.9	20.9	19.9	100.4