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转！安捷伦液相色谱仪维修小妙招：详细解析仪器常见故障及解决方法

中山某知青

2018/08/13

液相色谱（LC）

可能原因：
（1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内；
（2）样品污染沉积；
解决方法：
处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；
对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

2. 指示可能原因：

（1）泵密封垫圈磨损；
（2）大量气泡进入泵体。
解决方法：
处理对于第一种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
3. 不稳定
可能原因：
系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。
解决方法：
处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
4. 峰分叉可能原因：

（1）色谱柱被污染；
（2）柱头填料塌陷；
解决方法：
处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。
对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
5. 重复性差可能原因：

（1）进样阀漏液；
（2）加样针不到位；
（3）液量不足；
解决方法：
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈；
对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。
另外日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要：
（1）注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；
（2）样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；
（3）色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
6. 其它原因及解决方法，故障类型可能原因解决方法

基线噪声大
随机性－污染物积聚冲冲洗柱；净化样品；使用HPLC级溶剂
连续性－检测器灯故障更换紫外灯（寿命为1000小时）
偶然性－外部电气干扰使用LC系统专用稳压器
样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6
双峰
样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6
进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相
滤芯堵塞更换并使用0.5 μm 孔隙率的在线过滤器
柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙；重填柱
进样器流路不通畅更换进样器转子
柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部
柱上样品超载使用更高负载量的固定相增加色谱柱内径减少样品量
单峰－存在干扰性组分净化样品；预分离
拖尾峰
开始出双峰请参见双峰
存在未扫的死体积减少接头的数量确保进样器密封垫紧密确保接头正确固定
碱性化合物－硅醇相互作用换成聚合物固定相
碱性物质－硅醇相互作用使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺
硅胶基－柱降解使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻
峰展宽
进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质
进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散
数据系统的采样速率过低增大采样
检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配
流动相粘度过高提高柱温
检测器池容积过大使用尽可能小的池容积（系统中无热交换器）
注射器体积过大减少进样量
保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相
压力波动
单向阀泄漏更换单向
泵密封垫泄漏更换泵密封
微粒积聚过滤样品；在线过滤器；过滤流动相
压力渐增
微粒积聚过滤样品；在线过滤器；过滤流动相
水/有机系统－缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物；确保兼容性
保留超出总渗透体积
体积排阻－特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂
保留时间不断变
动柱温不断变化使柱恒温；绝缘；保证实验室温度恒定
平衡时间不足以适应梯度洗脱要求，或等度洗脱流动相起变化确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 个柱容积通过色谱柱
流动相组分选择性蒸发减少氦气的剧烈脱气；保持溶剂贮器盖好；制备新的流动相
缓冲能力不足用>20 mM 浓度的缓冲液
在线流动相混合不一致保证梯度系统输送恒定组成；与手动制备流动相核对
污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物
最初几次进样— 吸附在活性部位用浓样品进样冲洗柱，使其处于正常状态
保留时间逐渐缩短
流速在增加检查泵以确保正确；否则需重调
柱上进样超载减少样品
键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间
保留时间逐渐增加
流速在减慢解决液流中的漏液现象，更换泵密封垫，检查泵的涡流和气泡
硅胶填料的活化点使用流动相改性剂
键合固定相的流失保持流动相pH 值在2-8.5 间
流动相组成在变化确保流动相容器盖好
硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱
硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的填充料
灵敏度问题
峰位于检测器线性范围之外稀释或浓缩使之处于线性区内
最初几次进样—样品在样品池或柱中被吸附自动进样器流路阻塞用浓样品处理样品池/柱
自动进样器流路阻塞检查流量情况，确保无阻塞现象
进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品
在样品制品时有关的样品流失用内标法在制备样品，优化样品制备方法
柱平衡时间减慢（离子对现象）
长链离子对试剂平衡时间慢使用较短的烷链试剂

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感谢分享！不仅局限于安捷伦，其他仪器中遇到此类问题也可以参考解决

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一般C18色谱柱的耐受温度是多少

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感谢分享，学习一下了！

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