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【仪器故事】开气质联用仪一个月，所跳过的坑！

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2018/09/03
鹤壁农检联合队

私聊

气质联用（GCMS）

【仪器故事】开气质联用仪一个月，所跳过的坑！

单位购买了三重四极杆气质联用仪7000D，我们先自行摸索，按照安装工程师讲的操作步骤，进行了操作，而后到成都接受安捷伦培训师陈佳老师的培训，陈佳老师的课讲的通俗易懂，思路清晰，讲课与上机相结合，让我学到不少技巧，回来后就能开发方法，通过这一个月的开机试验，遇到不少坑，为防止大家走同样的弯路，分享给大家。
一、所跳过的坑
第一坑：反吹压力用打开吗？
仪器配置是7890B+7000D，EI源，两根DB-5色谱柱（15m*0.25mm*0.25um）串接，有反吹功能。反吹功能是当分析的最后一个化合物流出色谱柱后，通过改变进样口和反吹EPC的压力反转色谱柱气流方向，就可实现除去高沸点化合物，减少污染，通过反吹可以避免高沸点化合物基质进入检测器，特别是MSD，减少高沸点物对色谱柱和检测器的污染，缩短运行时间。

图1：两根柱子串接
既然有反吹功能，我想当然在He反吹EPC上点了开启，在Aux PCM A He上也点了开启，然后不管下载哪个方法都失败，显示反吹压力关闭，PCMA辅助压力关闭。打800电话，告知反吹压力在PCM A里设定，已经自动设置好了，不用把反吹EPC和Aux PCM A打开，唉，真是个坑呀。
这两个功能都不用开启，为何设定这个功能，什么情况下用开启？我询问了维修工程师张洪，他的回答是这个碰撞池EPC有一路气是接反吹的，但你的仪器没有接到这一路上，所以你不用管它，设定开启与安装时实际安装的气路有关。

图2：反吹功能的设定
第二坑：空气与水检查通不过
跳过这个坑，可以进行调谐了，为保证通过调谐，先检查空气与水，发现水份通过，氧气与氮气通不过，可能是抽真空时间短吗？继续抽真空，直到下午，继续检查空气与水，还是不通过。仔细阅读成都培训时陈佳老师讲的内容，如果氧气与氮气没通过，可能是气相与质谱仪有漏气的地方。
先从气相漏气的地方查起，检查进样垫，将接进样口与接质谱峰的色谱柱都再拧紧了些，检查空气与水，可以通过了。色谱柱接口端经过高温后，应该再拧一下，以防有微漏，影响调谐。

图3：空气与水检查
第三坑：进单标确定保留时间与母离子？
没去成都培训前，我开机进行了SCAN扫描，36种农药挨个进单标确定保留时间与母离子，程序升温是39min，所以SCAN扫描进行了好几天才扫完。然后进行产物离子扫描，找离子对，还有CE电压值，这得多长时间才能走完呀？还要找合适的CE电压值，一个个进样，从5，10.。。。。。55，采集完，一个个记录丰度比，眼都花了，工作量真大呀。
培训后才明白，36种可以配混标进行SCAN扫描，不用担心保留时间会一样，因为它们的离子对不一样。这样节省不少时间，而CE电压值的确定可以通过设计实验助手，在碰撞能量里输入5，10.。。。。。直到55，生成序列，自动进样，数据采集完再点分析实验助手，自动选择合适的CE值。
安装培训时是简单的培训，会用就行，一些技巧性的知识还要去厂家进行系统培训，否则坑很大，很费时间与很费眼。

图4：设计实验助手与分析实验助手
第四坑：保留时间锁定无法做？
想试试保留时间锁定的功能，点方法点采集RTLock校正数据，发现柱流量只有0.467，与培训时讲的内容不符，打800电话，让检查柱流量在运行方法时有无变化，发现柱流量一直在变化，不能稳定在设定值1.0mL/min，同意工程师上门维修。
张洪工程师来了后，在软件上将色谱柱设为恒定流量，观察柱流量的变化，还是不行，又在仪器面板上把AUX EPC#上，把压力控制模块（PCM）A设定为前向压力控制，再运行方法，色谱柱流量也不会一直变了。
前向压力控制与前向流量控制的区别是，当用压力控制时，色谱柱柱流量设为恒定流量，这时色谱柱的流量是不变的，一直保持设定值，为了保持这个流量，压力会变化。前向压力控制时，流量是改变的，压力不变。如果选错会出现保留时间锁定时，柱流量只有0.467的情况。

图5：前向压力控制的设定
事情到此就结束了，可是接下来发现一件事，我用其它方法进样时，发现柱流量也在变化了，我学着按上述步骤设定后，不能上传到方法里，比如在仪器面板上把AUX EPC#上，把压力控制模块（PCM）A设定为前向压力控制，如何让方法收到呢？张洪又教一招，在软件空白处点右键，将方法下载到GC上，可以进样了。

图6：将方法下载到GC
第五个坑：照抄方法不行？
安捷伦公司推出了与用DB-5做农残的DMRM方法，我落得现成，拿来就用，方法里每个农药都是4个离子对，因为我做不了几百种，所以删除了多余的，只留下36种，变成我的方法，然后用DMRM方法扫描，出现色谱图，一切好像很顺利。接下来我用了保留时间锁定这个功能。但柱流量只有0.2左右，我用以上步骤也解决不了，张洪建议找一正常方法，复制后改成DMRM方法，或者将default.m方法复制一个，在它上面修改成DRMR方法。
可问题关键是化合物如何复制过去？要一个个输进去吗？36种每种4个离子对，我都算不清了，真是个坑呀，打800，推荐了一个好办法，可以在化合物表下面点导出化合物列表，文件名输入，点保存，点新方法，点导入化合物列表，化合物表中的内容复制进去，但美中不足的是离子对只有3对，需要手工输入1对离子对，输入时要在第3对处点插入一行，这样保证CAS号是正确的。比一个个输进去简单多了。

图7：复制化合物
第六坑：五指峰如何破解？
跌跌撞撞走到这一步，终于建成方法，出了色谱图了，可是新问题又出现了，菊酯类农药出组峰，保留时间见下表，配制这5种农药混标，浓度为10ug/mL，进行SCAN扫描，如下图：

图8：SCAN方法扫描5种菊酯类标液

SCAN的扫描，可以看到峰有些重合，但基本出的可以，但是用DMRM方法扫描了出来的色谱图就难看多了。做了一条标准曲线，浓度值为0.005、0.01、0.05、0.1、0.5ug/mL，其它出的正常，但到组峰处就成了五指峰。可以看到随着浓度增加，峰越来越好，但浓度小时，好像有毛刺出现，很难看。

图9：DMRM方法扫描得到的五指峰

如何让小浓度的标液出峰没有毛刺，不成五指峰，通过800还有维修工程师联系，进行了以下操作：
1、进空气针
将自动进样器改为手动，在1号瓶放空瓶，按键盘上start，还用DMRM方法看基线。发现进空针时，在30-33min时，也出五指峰。
2、老化柱子、换新衬管
只进空气，还出成五指峰，可能是柱子或衬管里有污染，卸真空，卸柱子，换了新衬管，老化柱子，老化后切柱头，继续进空气针，还是依旧五指峰。
3、降低柱温
色谱柱DB-5柱，程序升温最高温度为300℃，那么随着温度升高，柱流失越严重，五指峰会不会是柱流失造成的？如果这几种标液在280℃时能出峰，会不会情况会有所好转，把程度升温的最高温度由300℃降为280℃，进空气样，五指峰下降不少。

图10：进空气针的五指峰

4、进标准曲线
同样的浓度进样，五指峰明显有所改善，小浓度时还有，用QQQ定量，直线相关系数0.995以上，效果不错。

图11：降低柱子温度后的五指峰

第七坑：标准直线做不直？
五指峰已破，做标准曲线，用QQQ定量软件进行标准曲线的绘制，有两个功能可用，一是峰加和，上面所述组峰均可加和得一条直线；二是平均重复进样点，如果浓度点每个进2针，可以将2针平均值做为一个点来绘制，这里不再赘述。
横看成岭侧成峰，远近高低各不同，36种标液不会一样的，绝大多数直线的相关系数能达到0.995-0.999以上，可是有几个峰做出来相关系数差的多，比如乙酰甲胺磷、氧乐果、甲拌磷、甲拌磷砜，相关系数在0.992左右，而且配制浓度为0.005与0.01时，峰面积几乎找不到，定性离子与定量离子也找不到，单独配制也不行，这个问题留给高手们回答吧。

图12：标准直线的相关系数

二、总结：
开气质联用仪跳过这几个坑，每有坑必有长进，这一个月的时间，可以说殚精竭虑，呕心沥血，遇到的坑不少，不过进步也不小。
1、气质联用仪有一部分与气相色谱仪相同，比如柱流量、检查漏气等，上面三个坑都是气体有关，空气与水检查通不过时，如果氧气与氮气比较高，检查进样垫、色谱柱接进样口、与质谱峰的接口，只要再拧紧些就行。反吹功能很好，但应问清气路如何接的，He反吹EPC开启后，反而下载方法失败。柱流量设为恒定流量，仪器面板上设为前向压力控制，这样在做保留时间锁定时，才不会出现柱流量只有0.2-0.4的情况。
2、现成的方法可以拿来用，但仪器气路连接或设置不同，会出现一些故障，可以在默认方法default.m方法上复制修改，化合物表可以导出导入，复制进去，得到新方法。
3、程序升温程序中最高温度不要设的太高，能出峰就行，温度太高，柱流失会更快，更严重，在峰形上很难看，也会影响定量。长期在高温下运行，柱子寿命会缩短。
4、最后感谢成都培训中心的陈佳、维修工程师张洪、800电话的服务人员，这一个月来，几乎每天都向您们咨询问题，甚至在中午晚上还向您们发微信，感谢您们不厌其烦的指导与帮助，让我这一个月来进步很大，再次感谢您们。

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