超高效液相色谱法测定罗汉果皂苷V

dgby

2018/09/12

私聊

液相色谱（LC）

1、材料与仪器
罗汉果皂苷V对照品(来源：中国检验检疫局；批号：111754-200601；纯度：100%)；乙腈（色谱纯，上海安普实验科技股份有限公司）；一级水；磷酸（分析纯，广州化学试剂厂）、清咽含片(汤臣倍健股份有限公司)。
超声波清洗器(EQ-500，昆山市超声仪器有限公司)；waters超高效液相色谱仪(沃特世科技（上海）有限公司)；电子天平(感量0.1mg, 梅特勒-托利多科学仪器有限公司)；色谱柱(C18，XSELECT HSS T3 2.5μm 2.1×100mm，沃特世科技（上海）有限公司)。
2、色谱条件
色谱柱(C18，XSELECT HSS T3 2.5μm 2.1×100mm)；流速：0.4mL/min；柱温：40℃；进样量：5μL；检测波长：203nm，流动相：乙腈: 0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，如下表：

时间（min）	乙腈（%）	0.1%磷酸水（%）
0	18	82
1	18	82
5	27	73
7.5	27	73
7.6	18	82
10	18	82

3、标准品溶液的配制
精密称取罗汉果皂苷V对照品20.00 mg，置于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得罗汉果皂苷V对照品溶液，为储备液。分别精密吸取罗汉果皂苷V标准贮备液稀释成5个罗汉果皂苷V标准梯度使用液，浓度分别为0.033mg/mL、0.0504mg/mL、0.083mg/mL、0.166mg/mL、0.333mg/mL。
4、供试品溶液的配制
精密称取样品0.29g，置于25 mL棕色容量瓶中，加甲醇适量，于45℃超声30min，并不时振摇样品，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，即得。
5、标准曲线的绘制
将标准系列溶液浓度为0.033mg/mL、0.0504mg/mL、0.083mg/mL、0.166mg/mL、0.333mg/mL的罗汉果皂苷V标准液进行UPLC分析，记录色谱图，以标准品的浓度为横坐标，标准品的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。
6、检出限实验
将浓度为0.77 μg/mL的对照溶液进样测定，通过工作软件的计算得S/N=3。按实际样品的处理过程计算。
7、精密度实验
精密称取样品6份，按2.4供试品制备方法处理样品，检测样品含量，计算其RSD（%）。
8、回收率实验
精密称取约0.29g样品9份，置于25mL容量中，分成3组，每组3份，于每一组中分别精密加入罗汉果皂苷V标准使用液(浓度为0.8324 mg/mL) 1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL，加入适量的甲醇，45℃超声30min使溶解并定容至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜过滤，即可。
9、结果与讨论
9.1 标准曲线确证结果
测定罗汉果皂苷V的标准曲线见图1，其标准方程为Y= 2877896.2267X+2312.4018（r=1.0000），线性范围为0.033-0.333mg/mL。

9.2 检出限和定量限
分析方法的检出限和定量限由信噪比（S/N）计算。检出限定义为S/N=3时对应的待分析浓度，定量限定义为S/N=10时对应的待分析浓度。
9.2.1 检出限将浓度为0.77 μg/mL的对照溶液进样，通过工作软件的计算得S/N=3。按实际样品的处理过程计算，方法的检出限为：0.77μg/mL×25mL/0.29g= 66.4μg/g。
9.2.2 定量限取信噪比=10:1定为检测浓度，DL=2.57 μg/mL，按照实际样品的处理过程计算，方法的定量限为： 2.57μg/mL×25mL/0.29g = 221.6μg/g。
9.3 精密度实验结果
罗汉果皂苷V的精密度结果见下表，6个样品的含量范围为0.4325~0.4471g/100g，平均含量0.44g/100g，相对标准偏差(RSD)为1.5%，表明该方法有良好的精密度。

序号	称样量（g）	浓度	含量(g/100g)	平均含量(g/100g)	RSD（%）
序号	称样量（g）	（mg/mL）	含量(g/100g)	平均含量(g/100g)	RSD（%）
1	0.29263	0.05203	0.4445	0.44	1.5
2	0.29711	0.0516	0.4341
3	0.29574	0.05156	0.4358
4	0.29017	0.05021	0.4325
5	0.28762	0.05107	0.4439
6	0.28839	0.05158	0.4471

9.4 回收率实验结果
罗汉果皂苷V在3个不同添加水平下浓度的回收率结果见下表，3个浓度下样品中的罗汉果皂苷V的提取回收率范围是94.98%~100.83%，平均回收率为：97.6%，相对标准偏差（RSD）为1.8%。

序号	理论加	实测加标	回收率	平均	RSD
序号	标量(mg)	量(mg)	(%)	回收率（%）	(%)
1	1.33184	1.30079	97.668	97.58	1.8
2	1.33184	1.30239	97.788
3	1.33184	1.34284	100.826
4	1.6648	1.59282	95.676
5	1.6648	1.58125	94.981
6	1.6648	1.60273	96.271
7	1.99776	1.95674	97.947
8	1.99776	1.96715	98.467
9	1.99776	1.97061	98.641

9.5 测定条件讨论
经紫外扫描，罗汉果皂苷V在203nm处有最大的吸收，分析结果显示色谱图基线平稳，且各色谱峰峰形、分离度较好，所以选择了203nm作为检测波长。由于制剂配方成分的复杂，采用等度并不能很好的得到分离，因此试验所用的流动相是经过筛选得来，罗汉果皂苷V测定所用流动相是在普通液相色谱条件的基础上进行梯度洗脱优化，经多次试验达到了良好的分离效果，且基线比较平稳，同时配合超高效色谱柱，检测时间短，适合本品的含量测定。

分
该帖子已被版主-夏天的雪加10积分，加2经验;加分理由:原创奖励

相关话题