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【第十一届原创】【检测故事】我与食用油的检测故事

sdlzkw007

2018/09/30

私聊

食品常规理化分析

【检测故事】我与食用油的检测故事
样品：食用油
检测项目：苯并（α）芘
依据标准：GB 5009.27-2016食品中苯并（α）芘的测定

1）原理
试样经过有机溶剂提取,中性氧化铝或分子印迹小柱净化,浓缩至干,乙腈溶解,反相液相色谱分离,荧光检测器检测,根据色谱峰的保留时间定性,外标法定量。
2）试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
2.1 试剂
2.1.1 甲苯(C7H8):色谱纯。
2.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。
2.1.3 正己烷(C6H12):色谱纯。
2.1.4 二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。
2.2 标准品
苯并(a)芘标准品(C20H12,CAS号:50-32-8):纯度≥99.0%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
警告———苯并(a)芘是一种已知的致癌物质,测定时应特别注意安全防护! 测定应在通风柜中进行并戴手套,尽量减少暴露。如已污染了皮肤,应采用10%次氯酸钠水溶液浸泡和洗刷,在紫外光下观察皮肤上有无蓝紫色斑点,一直洗到蓝色斑点消失为止。
2.3 标准溶液配制
2.3.1 苯并(a)芘标准储备液(100μg/mL):准确称取苯并(a)芘1mg(精确到0.01mg)于10mL容量瓶中,用甲苯溶解,定容。避光保存在0℃~5℃的冰箱中,保存期1年。
2.3.2 苯并(a)芘标准中间液(1.0μg/mL):吸取0.10mL苯并(a)芘标准储备液(100μg/mL),用乙腈定容到10mL。避光保存在0℃~5℃的冰箱中,保存期1个月。
2.3.3 苯并(a)芘标准工作液:把苯并(a)芘标准中间液(1.0μg/mL)用乙腈稀释得到0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL的校准曲线溶液,临用现配。
2.4 材料
2.4.1 中性氧化铝柱:填料粒径75μm~150μm,22g,60mL。
注:空气中水分对其性能影响很大,打开柱子包装后应立即使用或密闭避光保存。由于不同品牌氧化铝活性存在差异,建议对质控样品进行测试,或做加标回收试验,以验证氧化铝活性是否满足回收率要求。
2.4.2 苯并(a)芘分子印迹柱:500mg,6mL。
注:由于不同品牌分子印迹柱质量存在差异,建议对质控样品进行测试,或做加标回收试验,以验证是否满足要求。
2.4.3 微孔滤膜:0.45μm。
3）仪器设备
3.1 液相色谱仪:配有荧光检测器。
3.2 分析天平:感量为0.01mg和1mg。
3.3 粉碎机。
3.4 组织匀浆机。
3.5 离心机:转速≥4000r/min。
3.6 涡旋振荡器。
3.7 超声波振荡器。
3.8 旋转蒸发器或氮气吹干装置。
3.9 全自动固相萃取装置。
4）实验步骤
4.1 试样制备、提取及净化
4.1.1 谷物及其制品
预处理:去除杂质,磨碎成均匀的样品,储于洁净的样品瓶中,并标明标记,于室温下或按产品包装要求的保存条件保存备用。
提取:称取1g(精确到0.001g)试样,加入5 mL 正己烷,旋涡混合0.5 min,40 ℃下超声提取
10min,4000r/min离心5min,转移出上清液。再加入5mL正己烷重复提取一次。合并上清液,用下列2种净化方法之一进行净化。
净化方法1:采用中性氧化铝柱,用30mL正己烷活化柱子,待液面降至柱床时,关闭底部旋塞。将待净化液转移进柱子,打开旋塞,以1mL/min的速度收集净化液到茄形瓶,再转入50mL正己烷洗脱,继续收集净化液。将净化液在40℃下旋转蒸至约1mL,转移至色谱仪进样小瓶,在40℃氮气流下浓缩至近干。用1mL正己烷清洗茄形瓶,将洗涤液再次转移至色谱仪进样小瓶并浓缩至干。准确吸取1mL乙腈到色谱仪进样小瓶,涡旋复溶0.5min,过微孔滤膜后供液相色谱测定。
净化方法2:采用苯并(a)芘分子印迹柱,依次用5mL二氯甲烷及5mL正己烷活化柱子。将待净化液转移进柱子,待液面降至柱床时,用4mL正己烷淋洗柱子,弃去流出液。用4mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。将净化液在40℃下氮气吹干,准确吸取1mL乙腈涡旋复溶0.5min,过微孔滤膜后供液相色谱测定。
4.1.2 熏、烧、烤肉类及熏、烤水产品
预处理:肉去骨、鱼去刺、贝去壳,把可食部分绞碎均匀,储于洁净的样品瓶中,并标明标记,于-14℃~-18℃冰箱中保存备用。
提取:同5.1.1中提取部分。
净化方法1:除了正己烷洗脱液体积为70mL外,其余操作同4.1.1中净化方法1。
净化方法2:操作同4.1.1中净化方法2。
4.1.3 油脂及其制品
提取:称取0.4g(精确到0.001g)试样,加入5mL正己烷,旋涡混合0.5min,待净化。
注:若样品为人造黄油等含水油脂制品,则会出现乳化现象,需要4000r/min离心5min,转移出正己烷层待净化。
净化方法1:除了最后用0.4mL乙腈涡旋复溶试样外,其余操作同4.1.1中的净化方法1。
净化方法2:除了最后用0.4mL乙腈涡旋复溶试样外,其余操作同4.1.1中的净化方法2。
试样制备时,不同试样的前处理需要同时做试样空白试验。
4.2 仪器参考条件
a) 色谱柱:C18,柱长250mm,内径4.4mm,粒径5μm,或性能相当者;
b) 流动相:乙腈+水=88+12;
c) 流速:1.0mL/min;
d) 荧光检测器:激发波长384nm,发射波长406nm;
e) 柱温:35℃;
f) 进样量:20μL。
4.3 标准曲线的制作

将标准系列工作液分别注入液相色谱中,,测定相应的色谱峰,以标准系列工作液的浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,得到标准曲线回归方程。苯并(a)芘标准溶液的液相色谱图见下图

5）精密度

在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。本标准方法的精密度数据如下。

苯并芘精密度数据表

序号	测定值（ng/ml）	RSD（%）
1	1.921	1.56
2	1.966
3	1.908
4	1.987
5	1.970
6	1.949

6）加标回收

在待测样品中加入一定已知浓度的标准样品，混合均匀后，按照GB 5009.27—2016方法进行前处理和仪器分析，计算回收率。在本实验中，通过对样品进行加标试验计算回收率。

苯并芘回收率数据表

序号	加标量（ng/ml）	含量（ng/ml）	回收率（%）	RSD（%）
1	10	10.219	102	3.37
2	10	10.299	103
3	10	9.669	96.7
4	60	56.316	93.86	4.15
5	60	60.972	102
6	60	58.858	98.1
7	1	0.970	97.0	5.38
8	1	1.076	108
9	1	1.025	102

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