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液相走梯度空白中有鼓包,峰拖尾,什么原因啊啊啊

液相色谱(LC)

  • 问题一:
    流动相 0.1%磷酸。乙腈
    走梯度时,空白和样品有鼓包,而且鼓包不随进样量的大小变化
    以下为空白和样品图


    换了方法以后走空白却没有如此大的鼓包!
    流动相为0.1TFA%和乙腈,梯度在图内,换方法后的空白如下图
    实在是不理解,空白是乙腈,已经头都变成两个大了

    问题二,仪器是新的,柱子是新的,样品走的峰形挺好的,今天研究员新走了一个样,产品中带有两个苯环,好像叫联苯胺什么的- -溶解的时候尝试纯乙腈不溶,后加了水和乙腈还有少量0.05%磷酸超声溶解了
    走出来的峰拖尾严重。
    流动相:A0.1%磷酸 B乙腈 210nm 30℃
    梯度:A B
    0 20 80
    12 5 95
    20 5 95
    是否是该产品不适用于该方法?
    求解求解……问题太多,已经处理不过来了
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  • 检测老菜鸟

    第1楼2019/04/01

    应助达人

    问题一:进样或者检测系统可能有残留。或者你再更换回去,看是否你的样品中有残留
    问题二“”尝试下调PH,或者走缓冲盐是否可以改善峰拖尾现象

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  • m3116636

    第2楼2019/04/02

    很可能是柱子残留,我冲了两天了,峰只是每天小了一点点,没有完全冲走,现在怀疑是不是和柱内基质反应结合了- -
    我用10%乙腈冲2个小时再更换成90%的乙腈冲了2小时,交替百分百乙腈4小时,再换成100%冲4小时,一个晚上下来,峰只缩小了一半- -……猜测的是有活泼性强的物质进去与柱子基质结合,只能每次用这种方式冲出一点,而且它只在10%乙腈上升到90%乙腈的时候出峰!其余都没有任何峰,是不是我冲洗方式不对,有更好的方法吗?

    检测老菜鸟(v3295053) 发表:问题一:进样或者检测系统可能有残留。或者你再更换回去,看是否你的样品中有残留
    问题二“”尝试下调PH,或者走缓冲盐是否可以改善峰拖尾现象

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  • m3116636

    第3楼2019/04/02

    现在差不多可以肯定的是,那个小包也是柱内杂质,而且是逐渐变大的,冲洗之后只是勉强降低,这个杂质也会拖尾 - -……求解决了……

    m3116636(m3116636) 发表: 很可能是柱子残留,我冲了两天了,峰只是每天小了一点点,没有完全冲走,现在怀疑是不是和柱内基质反应结合了- -
    我用10%乙腈冲2个小时再更换成90%的乙腈冲了2小时,交替百分百乙腈4小时,再换成100%冲4小时,一个晚上下来,峰只缩小了一半- -……猜测的是有活泼性强的物质进去与柱子基质结合,只能每次用这种方式冲出一点,而且它只在10%乙腈上升到90%乙腈的时候出峰!其余都没有任何峰,是不是我冲洗方式不对,有更好的方法吗?

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  • 检测老菜鸟

    第4楼2019/04/02

    应助达人

    有没有其他柱子,检测一下到底是柱子残留还是检测器流通池,柱子冲洗先要搞清楚你那个物质是什么东西。

    m3116636(m3116636) 发表: 很可能是柱子残留,我冲了两天了,峰只是每天小了一点点,没有完全冲走,现在怀疑是不是和柱内基质反应结合了- -
    我用10%乙腈冲2个小时再更换成90%的乙腈冲了2小时,交替百分百乙腈4小时,再换成100%冲4小时,一个晚上下来,峰只缩小了一半- -……猜测的是有活泼性强的物质进去与柱子基质结合,只能每次用这种方式冲出一点,而且它只在10%乙腈上升到90%乙腈的时候出峰!其余都没有任何峰,是不是我冲洗方式不对,有更好的方法吗?

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  • m3116636

    第5楼2019/04/02

    接了双通、走流动相,梯度,没有发现杂质峰。
    在这之前走了活泼性强的东西,例如甲基草酰氯

    检测老菜鸟(v3295053) 发表: 有没有其他柱子,检测一下到底是柱子残留还是检测器流通池,柱子冲洗先要搞清楚你那个物质是什么东西。

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  • m3116636

    第6楼2019/04/02

    把柱子接到干净的仪器上,一样有杂峰,大小不变,说明柱子污染了
    然后我把别的仪器上正常的色谱柱接到这台上,那个位置也有峰,而且比柱子里面的还要大……
    这个可能是哪里污染了……进样系统吗?

    m3116636(m3116636) 发表: 接了双通、走流动相,梯度,没有发现杂质峰。
    在这之前走了活泼性强的东西,例如甲基草酰氯

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  • tkom123

    第7楼2019/04/02

    弱弱的问一下,这不是梯度的鬼峰吗?感觉磷酸不太好,在210nm波长下磷酸水流动相中的杂质洗脱产生的峰。

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  • m3116636

    第8楼2019/04/02

    猜测过,但是如果是磷酸的问题,别的仪器上用的是同样的梯度同样的流动相……却没有这个峰……

    tkom123(tkom123) 发表:弱弱的问一下,这不是梯度的鬼峰吗?感觉磷酸不太好,在210nm波长下磷酸水流动相中的杂质洗脱产生的峰。

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  • 雨红星宇

    第9楼2019/04/02

    接了双通没出现杂峰,说明系统没问题,那就是说明你2根柱子都被污染了,有没有新的,测试一下看看新柱子有没有峰

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  • 夏天的雪

    第10楼2019/04/02

    应助达人

    从你的排查过程看,应该是系统被污染了,有残留。可以直接用甲醇水或乙腈水做梯度,看是否有峰,或者等度走,看是否也会有杂峰,从而排除是否是试剂原因还是等度的原因引起的

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