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高效液相色谱中接的制备柱，进样量与出峰时间有关系吗

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2019/07/10

液相色谱（LC）

我在使用制备柱的时候遇到了一个问题，随着进样量增加，分离会变差（这个是正常现象，可以理解），为什么出峰时间会提前？

发现这个情况的具体过程如下：
首先按照正常C18反相（4.6*250，5um）的色谱条件（梯度，起始有机相比例35%）下主成分18min出峰，目标14min出峰;
制备柱为10*250,10um
岛津的液相，走的单泵，当浓度为5mg/ml，进样量为100ul时，有机相比例50%可以得到很好的分离，目标出峰时间15min；
当进样量为600ul时，出峰时间变为10min，分离度差，因此改有机相比例为40%，目标出峰时间17，得到很好分离；
当浓度提高为15mg/ml时，进样量600ul，出峰时间变为12min，且杂质与主成分连成一片无法分离。

另外还有一个问题，我在一个能分离的条件下对流出的样品进行了接样，想看下纯不纯，然后发现两个挨着流出的杂质，在正常检测方法中出峰时间相差非常大！
举个例子：17min接样，检测到的杂质A，出峰时间为14min（此时有机相比例35%）；18min接样，检测到杂质B，出峰时间46min（此时有机相比例75%），杂质B正常情况下在低比例有机相下是洗脱不出来的

PS：在这几个进样量下，主成分都是满载的，目标杂质峰高最高会1500mv的样子。

想请教各位大神，这种制备柱与普通的C18反相柱有什么区别？尤其是在分离原理上，有什么不一样的地方吗？为什么进样量会对出峰时间有这么大的影响？为什么不应该出来的杂质出来了？

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