实验过程中参照标准进行，往往不能按照标准重复出来，根据药典标准要求对茜草含量进行分析，发现流动相的比例不太适应本实验室，对其进行方法摸索。
1材料
茜草药材（送检样）；甲醇（分析纯），浓盐酸，三乙胺，磷酸；大叶茜草素，羟基茜草素对照品（均购自中检院）。
2 仪器与设备
岛津液相LC-20AT（带紫外检测器及自动进样器）；色谱柱安捷伦Zorbax SB C18(250mm*4.6μm*5μm)；超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；DZKW-S-6型电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗器械仪器有限公司）。
3 实验过程（按照2015年版中国药典一部 茜草项下含量测定操作）
取本品粉末（过二号筛）约0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100ml，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理（功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加甲醇-25%盐酸（4 : 1)混合溶液20ml溶解，置水浴中加热水解3 0分钟，立即冷却，加入三乙胺3ml，混匀，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。以甲醇-乙腈-0.2%磷酸溶液（25 : 50 :25)为流动相；检测波长为250nm。
4 流动相条件
（1）按照药典流动相条件甲醇：乙腈:0.2%磷酸溶液（25：50：25），发现样品10min之前杂质较多，羟基茜草素受杂质干扰严重，调有机相比例但是依然不能完全分开，我们更换色谱柱，效果不佳。
药典标准流动相比例等度条件下的标准品色谱图
药典标准流动相比例等度条件下的样品色谱图
（2）配成单相混合溶液也是羟基茜草素分离度不好。
（3）本实验室液相二元泵的多一些，我们为了减少流动相配比误差，将流动相条件改为两相走梯度洗脱，发现茜草中两种有效成分可以得到很好的分离，并且不受其他物质的干扰。乙腈与0.2%磷酸水梯度0min-40min 乙腈40%升至80%，40min-50min 80%乙腈。
乙腈和0.2%磷酸水梯度洗脱标样色谱图
乙腈和0.2%磷酸水梯度洗脱样品色谱图
检测中药的过程中发现大部分药材基质比较复杂，完全按照药典的比例不一定能有效分离，做研究的过程中，会对条件进行优化，以保证数据的准确性与可靠性！
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