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高效液相色谱-柱后衍生荧光光谱法测定黄瓜中氨基甲酸酯类农药残留

夏沫

2019/07/23
恒心永谱

私聊

液相色谱（LC）

氨基甲酸酯类化合物具有广泛的用途，可以在农业中当农药、制造医药的原料、树脂改性等。氨基甲酸酯类农药是一种合成农药，一般情况下无特殊气味，味道苦且有冰冷感觉，它是一种新型的被广泛使用的杀虫、杀螨、除草剂。具有种类多、杀虫效果好、药效残留期短、且毒性较低的特点。它不是剧毒化合物，但是具有致癌性。口服或者是注射氨基甲酸酯类会导致癌症，而且涂在皮肤上也会导致癌症。国际癌症研究机构在2007年把氨基甲酸酯类列为2A类致癌物。在一些发酵食品中和酒类、蔬菜、水果等食物中氨基甲酸酯类农药含量较高。急性氨基甲酸酯类农药中毒症状与有机氯农药中毒类似，但此类农药潜伏期短，病情相对较轻，恢复快。轻度中毒患者大多会出现眩晕、恶心、呕吐等症状，重度中毒患者大多会出现昏迷、脑水肿，肺水肿，以及呼吸抑制等。重度中毒的患者大多为口服患者。
本次检测样品用乙腈提取，使用高效液相色谱仪，样品经乙腈和水的流动相梯度洗脱带入C8色谱柱分离后，进入柱后衍生系统衍生，在激发波长为340nm，发射波长为465nm的条件下，在荧光检测器中测定。
一、实验试剂
使用药品均为色谱纯或分析纯，水为超纯水。
甲醇
乙腈
二氯甲烷
硼砂

氢氧化钠

2-疏基乙醇

氯化钠
无水硫酸钠
邻苯二甲醛

农药标准品

二、实验仪器
高效液相色谱仪，配有荧光检测器。

氮吹仪

纯水机
电子天平
均质器
旋转蒸发仪
固相萃取住（氨基柱，Aminopropyl，容积6mL，填充物500mg）
微量注射器
三、色谱条件
流动相：甲醇和水
流动相的梯度洗脱程序

时间/（min）	流量/(mL/min）	甲醇（%）	水（%）
0.00	0.8	15	85
2.00	0.8	25	75
8.00	0.8	25	75
9.00	0.8	40	60
10.00	0.8	45	55
19.00	0.8	80	20
25.00	0.8	80	20
26.00	0.8	15	85

色谱柱温度：42℃
OPA流速：0.30mL/min，水解温度100℃
NaOH流速：0.30mL/min，水解温度40℃
激发波长：340nm，发射波长：465nm。
四、实验前处理
0.05moL/L氢氧化钠溶液：称1g氢氧化钠于烧杯中,加少量水溶解后转移到500毫升容量瓶里,随后分3次清洗烧杯,将清洗溶液全部倒入容量瓶里,最后用水稀释至刻度线.摇匀备用。
OPA衍生试剂：称取19.1g硼砂置于1000mL容量瓶中超声溶解后，定容至1000mL，过0.22μm滤膜，置于棕色试剂瓶中。称取50 mg邻苯二甲醛溶于5mL甲醇中（注意避光），加至硼砂缓冲液中，再向缓冲溶液中加入100μL巯基乙醇。混匀，临用时配制。
标准溶液：将下表中的10种氨基甲酸酯类农药及其代谢产物标准品取各1mL混合置入容量瓶中，混匀后，取出一定量混合液，稀释200倍，待测。

序号	中文名	英文名	浓度μg/ml	溶剂
1	涕灭威亚砜	Aldicarb sulfoxide	1000	甲醇
2	涕灭威砜	Aldicadb sulfone	1000	甲醇
3	灭多威	Methomyl	1000	甲醇
4	3-羟基克百威	3-hydroxycabofuran	1000	甲醇
5	涕灭威	Adicarb	1000	甲醇
6	速灭威	Metolcarb	1000	甲醇
7	克百威	Carbofuran	1000	甲醇
8	甲萘威	Carbaryl	1000	甲醇
9	异丙威	Isoprocarb	1000	甲醇
10	仲丁威	fenobucarb	1000	甲醇

取市售黄瓜粉碎后，称取25g样品置于均质机中，加50m乙腈，匀浆1 min，过滤到已经加入约7g NaCl的量筒中，振荡混匀1 min，静置30 min，待水相和乙腈相完全分离，吸取上层乙腈相5.00 mL，氮吹至近干，用1 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）溶解后盖上铝等待过固相萃取柱净化。
激活固相萃取柱，在固相萃取柱上端加入适量无水硫酸钠，并用4 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）激活后，将待测样品注入固相萃取柱，用4 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）分2次洗脱，收集洗脱后样液，氮吹至近干，加入1mL 50%甲醇溶解残渣，混匀，过0.22μm滤膜，等待测定。
五、结果和讨论
分别吸取5.00μL标准混合溶液和净化后的样品溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比例定量，试样中被测农药残留量以质量分数ω计，单位以mg/kg表示，按以下公式进行计算：

式中：ρ ——标准溶液中农药的质量浓度，单位为mg/L
A ——样品溶液中被测农药的峰面积
As——农药标准液中被测农药的峰面积
V1——提取溶剂总体积
V2——吸取出用于检测的提取液的体积，单位为mL
V3——样品溶液定容体积，单位为mL
m——试样的质量，单位为g
标准品色谱图：

1-涕灭威亚砜；2-涕灭威砜；3-灭多威；4-三羟基克百威；5-涕灭威；6-速灭威；7-克百威；8-甲萘威；9-异丁威；10-仲丁威
标准品谱图中10中标准品峰型完好。连续进样三针标准品，做重复试验，将得到的谱图重合，如下图所示，所得谱图重叠良好。

样品色谱图：

经分析可知其黄瓜中含有灭多威，经计算可知黄瓜样品中灭多威的含量为0.33mg/kg，低于国标规定的蔬菜类最大检测浓度。

本文采用恒信柱后衍生系统对氨基甲酸酯类农残的检测进行了研究，将原标准中的进样量20uL调整为5uL，避免了溶剂效应的产生，使得前三个峰的峰形更加对称，重现性更好。因此恒信柱后衍生系统非常适合蔬菜水果中氨基甲酸酯类农残的检测，操作简便，重现性好，测定结果可靠。