仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >质谱 > 液质联用（LCMS） > 帖子详情

SPE C18脱盐

p3311681

2019/09/02

液质联用（LCMS）

请教大伙一个问题，关于SPE C18脱盐
我的样品是小鼠肝全蛋白，经过胰酶酶切和定量标记后想在上液质前脱盐。用的是waters的Sep Pak C18脱盐柱，样品和填料比为1:1000。
流程如下：
活化：1、1mL 100%乙腈
2、1mL 50%乙腈/50%水
平衡：0.1% FA，10倍柱体积
上样：样品用FA调至3~4，加入萃取柱中，使其按重力自然流出
清洗：1mL 0.1% FA，洗盐
洗脱：1mL 洗脱液（50%乙腈，0.1% FA），静置2min后，洗脱样品
回收穿过液，清洗液和洗脱液测肽段浓度，用的是thermo家的肽段定量试剂盒。回收效率只有60~70%。请问该如何改进流程？

分
该帖子已被版主-welewolf加2积分，加2经验;加分理由:鼓励发帖

相关话题

welewolf

第1楼2019/09/02

应助达人

建议尝试优化洗盐和洗脱步骤的溶剂用量。可以提高回收率的

0

hujiangtao

第2楼2019/09/02

应助达人

这么复杂的基质这个回收率可以了

0

p3311681

第3楼2019/09/03

是不是可以适当减少洗盐溶剂用量，因为肽段定量的时候发现有20%肽段在洗盐过程中被提前洗脱。那同时又应该怎么避免由于洗盐溶剂减少可能导致的脱盐不充分情况呢？感谢您的回复！
welewolf(v2823651)发表:建议尝试优化洗盐和洗脱步骤的溶剂用量。可以提高回收率的

0

p3311681

第4楼2019/09/03

感谢回复！但其实还是有些担心由于脱盐损失的样品导致后续二甲基定量检测蛋白差异的时候有误差，或者是引起的结果不稳定啊
hujiangtao(hujiangtao)发表:这么复杂的基质这个回收率可以了

0

welewolf

第5楼2019/09/03

应助达人

如果脱盐步骤的洗液不能减少，那只能增加洗脱步骤的洗液试试了；不过你现在的回收率也是可以接受的，只要相对标准偏差<10%即可。
p3311681(p3311681) 发表:是不是可以适当减少洗盐溶剂用量，因为肽段定量的时候发现有20%肽段在洗盐过程中被提前洗脱。那同时又应该怎么避免由于洗盐溶剂减少可能导致的脱盐不充分情况呢？感谢您的回复！

1

Ins_d5ddec35

第6楼2021/11/28

最近我也是用waters 的SEP 小柱除盐，用肽段检测试剂盒一测除盐液中也有肽段，甚至上样液自然重力流出的液体里面也有，哭泣，我用3ml 0.1%TFA，我还害怕盐冲不掉现在样品都给我冲出来了，盐还不知道除没除去

0

lijing320323

第7楼2021/11/28

咨询工程师

0

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...