抽真空对检测结果有影响吗？

avih1981

2019/10/31
鹤壁农检联合队

私聊

前处理综合讨论

抽真空对检测结果有影响吗？

水产品中孔雀石绿的检测多用《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》GB/T20361-2006这个标准，需要用PRS柱串连接酸性氧化铝固相萃取柱净化样品，抽真空过滤样品与不抽真空过滤样品对检测结果有影响吗？我们作了以下比较试验。

一、实验部分

（一）主要仪器设备与试剂

1、主要仪器设备

电子分析天平（感量0.0001）、电子分析天平（感量0.01）、高速冷冻离心机、PH计、氮吹仪、超声波清洗机、涡旋混合器、固相萃取装置、安捷伦1260高效液相色谱仪配荧光检测器。

2、试剂

乙腈（色谱纯）、二氯甲烷（色谱纯）、无水乙酸铵（分析纯）、冰乙酸（优级纯）、氨水（分析纯）、硼氢化钾（分析纯）、盐酸羟铵（分析纯）、对-甲苯磺酸（分析纯）、酸性氧化铝（分析纯）、孔雀石绿标准溶液（100Uug/mL）。

3、其他耗材

酸性氧化铝固相萃取柱（500mg、3 mL）、Varian PRS柱（500mg、3mL）、0.45um有机滤膜、一次性注射器。

4、实验方法

采用《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》GB/T20361-2006进行检测。

（二）标准溶液的配制

孔雀石绿标准溶液（100Uug/mL）。中间液浓度20ng/mL,工作液浓度1.00 ng/mL、2.00 ng/mL、5.00 ng/mL、7.00 ng/mL、10.00 ng/mL。

（三）液相色谱条件

色谱柱：安捷伦C18柱4.6mm×100mm,粒度3.5um；流动相：乙腈＋乙酸铵缓冲溶液（0.125mol/L,PH4.5）；流速1.3mL/min；柱温：35℃；激发波长：265nm,发射波长：360nm；进样量：5uL。

（四）前处理过程
称取5.00g样品于50mL离心管中，加入20ng/mL标液200uL，加入15mL乙腈，手摇振荡2 min，加5g酸性氧化铝，手摇振荡2min，4000r/min离心10min，上清液转移至125mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入2mL二甘醇，2mL硼氢化钾溶液，振摇2 min。在50mL离心管中继续加入2mL硼氢化钾溶液，再加入1.5mL盐酸羟胺溶液，2.5mL对-甲苯磺酸溶液，5.0mL乙酸铵溶液，涡旋2min。再加入10mL乙腈继续涡旋2min，4000r/min离心10min，上清液并入125mL分液漏斗中。重复操作一次。在分液漏斗中加入25mL二氯甲烷，剧烈振摇2min，静置分层一段时间后，将下层溶液转移至100mL茄形瓶中。继续在分液漏斗中加入5mL乙腈、10mL二氯甲烷，振摇2min，把全部溶液转移至50mL离心管，4000r/min离心10min，将下层溶液合并至250mL茄形瓶中。35℃旋转蒸发至近干，用2.5mL乙腈溶解残渣。将PRS柱安装在固相萃取装置上，上端连接酸性氧化铝固相萃取柱。用5mL乙腈活化，转移提取液到柱上，再用乙腈洗茄形瓶两次，每次2.5mL，依次过柱，弃去酸性氧化铝柱，吹PRS柱近干。加3mL等体积混合的乙腈和乙酸铵溶液，收集洗脱液。乙腈定容至3mL，过0.45um滤膜，供液相色谱测定。

二、结果与讨论

1、校准曲线

以孔雀石绿中间溶液配成标准的工作曲线浓度分别为1.00 ng/mL、2.00ng/mL、5.00 ng/mL、7.00 ng/mL、10.00 ng/mL。以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标做校准曲线，做一校准曲线，线性回归方程为Y=117.047844X+0.0439069，相关系数为0.9999。孔雀石绿在1-10ng/mL范围内线性良好。

2、加标回收

称10个样品加入浓度为20ng/mL的孔雀石绿标准溶液200uL，按上述前处理方法进行前处理，其中1-5号抽真空过滤样品，6-10不抽真空过滤样品。结果如下：

样品编号	试样质量m/g	定容体v/mL	上机液体积V3/uL	上机液浓度ng/mL	样品含量ug/kg	实测差(%)	允许差(%)	回收率(%)
1	4.98	3.00	20.00	6.217	3.75	5.7	≤15	91.2
2	4.99	3.00	20.00	5.901	3.55
3	4.98	3.00	20.00	6.041	3.64
4	4.98	3.00	20.00	6.512	3.92
5	4.99	3.00	20.00	5.612	3.37
6	4.99	3.00	20.00	6.713	4.04	1.1		99
7	4.99	3.00	20.00	6.562	3.95
8	4.98	3.00	20.00	6.552	3.95
9	5.01	3.00	20.00	6.620	3.96
10	4.98	3.00	20.00	6.512	3.92