峰形后拖尾是什么原因造成的 ?

[ 柱物理损坏 ] 色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决
方法就是更换新柱。
[ 柱内填料污染 ] 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。流动相所用
的各种溶剂至少是分析纯， 尽量使用色谱纯试剂。 流动相所用的水最好是超纯水
或全玻璃器皿双蒸水。用前先用 0.45um溶剂微孔过滤 ( 器) 过滤，除去可能存在
的微粒。流动相建议现用现配， 对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现
沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。
复杂样品可选用 0.45um 溶剂微孔过滤 ( 器) 或样品预处理柱对样品进行预处
理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。柱内填料污染
时，可将柱头螺丝卸下， 用专用工具挖出柱内前段被污染填料， 再以相同的填料
重新填入， 修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向， 冲洗色
谱柱( 约 20 至 30 倍柱体积，或视具体情况而定 ; 另外，此时不能接检测器 ) ，将
污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。
[ 柱进口处有异物 ] 当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出
滤帽并将其置于 20%硝酸溶液中，用超声波清洗约 20 分钟，再置于超纯水中，
并用超声波清洗约 10 分钟，重新装入色谱柱内即可。
[ 样品浓度过高致使柱超载 ] 样品在柱上超载能引起峰展宽， 拖尾( 或伸舌 ) 。
适当减小进样量或样品浓度 ( 需要时，可提高检测器灵敏度 ) 直至峰形和保留时间
不再改变，便可消除这种不良影响。 减小进样量还能改善其分离度。 正常情况下，
样品中每种化合物在 150?4. 6mm柱中进样量保持在 3～50ug 范围内，不会引起
明显超载。
[ 样品溶剂不对 ] 选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。最好选用流
动相溶解样品。
[ 柱外效应 ] 即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、 直径过粗、 管路接头
不匹配、有死体积，是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，
色谱柱的两端连接管路要尽可能短， 连接管内径尽可能细小， 切口务必平整光滑，
尽可能的减小死体积， 以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发
生。
[ 缓冲不足或不合适 ] 在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留
时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度 ( 与样品大小相匹配 ) 能改善此情况。
[ 硅醇基团作用 ] 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的
表面大约被键合相覆盖了一半， 其余的就是未被键合的硅醇基团。 所谓的保留是
指样品分子与键合相相互作用的结果。 但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存
的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理， 因此，发生了峰形拖
尾。为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入 25mM三乙胺 ( 抑制剂 ) 。三乙胺能
与硅醇基团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，
以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。使用长链的硅醇基抑制剂，
虽起效较慢， 但持续力较三乙胺长。 因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生
极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。
如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。
[ 柱内金属污染 ] 柱内金属污染 (Fe，Ni 等) 可引起某引些化合物峰形拖尾。
金属可由填料本身带进， 也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片， 随流
动相沉积到柱填料中。 例如 C18柱填料被金属污染后， 造成酸性 / 碱性样品拖尾，
可用碱洗 / 酸洗后再键合的填料，得到的峰是尖锐且对称的。