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VB6测试峰的强度很低

  • zyscontrol
    2020/05/09
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 各位大牛:遇到如下问题,不吝赐教

    在API4000上测试VB6,标品PLP(磷酸吡哆醛),内标为PL-d3,流动相:A 0.1%的甲酸水;B 乙腈,色谱柱为:venusil XPB Silica 2.1x100mm 3微米

    前处理方法为115μL人血清中加入5μLSW加入到1.5mL的离心管中,超声30min

    2)在涡旋振荡的条件下,加入260μL10%TCA5μL内标工作液

    3)涡旋振荡5min后,在室温条件下静置30min,然后又振荡5min

    4)在室温条件下孵育1h后,离心管混匀后在14000g条件下离心15min,沉淀蛋白质和细胞碎片。

    5)吸取100微升上清液转移到96孔板中,放置在进样器中测试。

    目前测试得到的PLP强度很低只有1000作用,请问前处理过程中有什么问题,或者需要注意什么才能提高测试的强度

    或者哪块有标准的前处理方法,分享一下,谢谢!
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  • hujiangtao

    第1楼2020/05/09

    应助达人

    VB6属于水溶性维生素,GB 5009.154是用液相荧光检测的,液质的话可能响应低一些,用液质做VB6的很少见到,VD比较多。
    楼主可以参考下链接中的步骤https://bbs.instrument.com.cn/topic/4512929

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  • 歪果仁zZ

    第3楼2020/05/09

    应助达人

    样品处理的建议你看一下这篇专利,查找优缺点即可,英盛生物的联系人我也有电话可以私信给你。我想如果目标物响应不够,那么问题也可能出自仪器自身,建议仔细清洗Curtain plate或自己动手清洗Q0,具体方法视频可以参照第十二届原创大赛个人团队Joy in share的文章及视频。除了清洗仪器还可以试一下增加进样量,还可以换根色谱柱,由于没有看到色谱质谱图,具体问题不能指出,只能大概回复了,建议下次可以附图这样更直观。希望对你有帮助!望采纳。

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  • 仪器小

    第4楼2020/05/10

    建议你建议厂家

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  • zyscontrol

    第6楼2020/05/11

    谢谢~我看一下国标。帖子中我看VB6的强度也很低,楼主也未解释原因。

    hujiangtao(hujiangtao) 发表:VB6属于水溶性维生素,GB 5009.154是用液相荧光检测的,液质的话可能响应低一些,用液质做VB6的很少见到,VD比较多。
    楼主可以参考下链接中的步骤https://bbs.instrument.com.cn/topic/4512929

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  • zyscontrol

    第8楼2020/05/11



    人血清样本质谱图,第二幅为标品,第三幅为内标



    标品质谱图,第二幅为标品,第三幅为内标

    可以看到测试标品没问题,测试人血清样本,强度就降低了,分析机器没问题,主要问题出在前处理上

    歪果仁zZ(v3255306) 发表:样品处理的建议你看一下这篇专利,查找优缺点即可,英盛生物的联系人我也有电话可以私信给你。我想如果目标物响应不够,那么问题也可能出自仪器自身,建议仔细清洗Curtain plate或自己动手清洗Q0,具体方法视频可以参照第十二届原创大赛个人团队Joy in share的文章及视频。除了清洗仪器还可以试一下增加进样量,还可以换根色谱柱,由于没有看到色谱质谱图,具体问题不能指出,只能大概回复了,建议下次可以附图这样更直观。希望对你有帮助!望采纳。

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  • welewolf

    第9楼2020/05/12

    应助达人

    从图谱上看应该是基质效应的问题,需要进一步优化一下前处理步骤;可以适当降低样品量或者增加最终定容体积

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  • zyscontrol

    第10楼2020/05/12

    谢谢~我们再尝试一下优化前处理过程试试~

    welewolf(v2823651) 发表:从图谱上看应该是基质效应的问题,需要进一步优化一下前处理步骤;可以适当降低样品量或者增加最终定容体积

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