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VB6测试峰的强度很低

  • zyscontrol
    2020/05/09
    • 私聊

液质联用（LCMS）

  • 各位大牛：遇到如下问题，不吝赐教

    在API4000上测试VB6，标品PLP（磷酸吡哆醛），内标为PL-d3，流动相：A 0.1%的甲酸水；B 乙腈，色谱柱为：venusil XPB Silica 2.1x100mm 3微米

    前处理方法为1）向15μL人血清中加入5μL的SW加入到1.5mL的离心管中，超声30min。

    2）在涡旋振荡的条件下，加入260μL10%TCA和5μL内标工作液。

    3）涡旋振荡5min后，在室温条件下静置30min，然后又振荡5min。

    4）在室温条件下孵育1h后，离心管混匀后在14000g条件下离心15min，沉淀蛋白质和细胞碎片。

    5）吸取100微升上清液转移到96孔板中，放置在进样器中测试。

    目前测试得到的PLP强度很低只有1000作用，请问前处理过程中有什么问题，或者需要注意什么才能提高测试的强度

    或者哪块有标准的前处理方法，分享一下，谢谢！
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  • hujiangtao

    第1楼2020/05/09

    应助达人

    VB6属于水溶性维生素，GB 5009.154是用液相荧光检测的，液质的话可能响应低一些，用液质做VB6的很少见到，VD比较多。
    楼主可以参考下链接中的步骤https://bbs.instrument.com.cn/topic/4512929

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  • 歪果仁zZ

    第3楼2020/05/09

    应助达人

    样品处理的建议你看一下这篇专利，查找优缺点即可，英盛生物的联系人我也有电话可以私信给你。我想如果目标物响应不够，那么问题也可能出自仪器自身，建议仔细清洗Curtain plate或自己动手清洗Q0，具体方法视频可以参照第十二届原创大赛个人团队Joy in share的文章及视频。除了清洗仪器还可以试一下增加进样量，还可以换根色谱柱，由于没有看到色谱质谱图，具体问题不能指出，只能大概回复了，建议下次可以附图这样更直观。希望对你有帮助！望采纳。

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  • 仪器小

    第4楼2020/05/10

    建议你建议厂家

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  • zyscontrol

    第6楼2020/05/11

    谢谢~我看一下国标。帖子中我看VB6的强度也很低，楼主也未解释原因。

    hujiangtao(hujiangtao) 发表:VB6属于水溶性维生素，GB 5009.154是用液相荧光检测的，液质的话可能响应低一些，用液质做VB6的很少见到，VD比较多。
    楼主可以参考下链接中的步骤https://bbs.instrument.com.cn/topic/4512929

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  • zyscontrol

    第8楼2020/05/11



    人血清样本质谱图，第二幅为标品，第三幅为内标



    标品质谱图，第二幅为标品，第三幅为内标

    可以看到测试标品没问题，测试人血清样本，强度就降低了，分析机器没问题，主要问题出在前处理上

    歪果仁zZ(v3255306) 发表:样品处理的建议你看一下这篇专利，查找优缺点即可，英盛生物的联系人我也有电话可以私信给你。我想如果目标物响应不够，那么问题也可能出自仪器自身，建议仔细清洗Curtain plate或自己动手清洗Q0，具体方法视频可以参照第十二届原创大赛个人团队Joy in share的文章及视频。除了清洗仪器还可以试一下增加进样量，还可以换根色谱柱，由于没有看到色谱质谱图，具体问题不能指出，只能大概回复了，建议下次可以附图这样更直观。希望对你有帮助！望采纳。

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  • welewolf

    第9楼2020/05/12

    应助达人

    从图谱上看应该是基质效应的问题，需要进一步优化一下前处理步骤；可以适当降低样品量或者增加最终定容体积

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  • zyscontrol

    第10楼2020/05/12

    谢谢~我们再尝试一下优化前处理过程试试~

    welewolf(v2823651) 发表:从图谱上看应该是基质效应的问题，需要进一步优化一下前处理步骤；可以适当降低样品量或者增加最终定容体积

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