【资料】2005年版《中国兽药典》一部（抗生素部分）解读

1、青霉素类抗生素
　　本版药典收载青霉素类抗生素18种。
　　（1）鉴别项除普鲁卡因青霉素注射液、氨苄西林外全部采用了HPLC法，部分品种删减了青霉素酶水解法和一些理化鉴别。
　　（2）在检查项下，需结晶性检查的有2种。有5个品种需用分子排阻色谱法测β-内酰胺类聚合物。β-内酰胺类抗生素药物中的高分子杂质主要分为蛋白（多肽）类杂质和聚合物类杂质两大类，前者主要来源于生产过程的残留和污染，后者主要是抗生素在生产、贮存和使用条件下发生分子间的聚合反应产物。国内外大量实验和临床研究证明，抗生素所致的速发型过敏反应和其中的高分子杂质有关。
　　（3）注射用青霉素钠（钾）等6个品种的热原检查改为细菌内毒素检查。
　　（4）进一步明确了青霉素类药物的无菌检查――经青霉素酶灭活后，采用薄膜过滤法检验。
　　（5）含量测定除普鲁卡因青霉素注射液继续采用抗生素微生物检定法测定外，其余全部采用HPLC法。其中，由电位滴定法改为HPLC法，克服了电位滴定法存在滴定液污染环境，降解物测定差异较大，产品技术掺假等缺点。目前,CP2005、BP、USP29中，青霉素类均采用HPLC法，此法应注意2-苯乙胺与青霉素的分离度及理论塔板数等系统适用性检查。
　　2、四环素类抗生素
　　四环素类抗生素共收载9个品种。
　　（1）在鉴别项下增加了9项HPLC法、4项IR法。
　　（2）检查项下，盐酸土霉素等2个品种增加了细菌内毒素检查，删减了热原检查；盐酸四环素删减了降压物质、异常毒性检查。同时，四环素类有7个品种应用HPLC进行有关物质的检查。
　　（3）含量测定由微生物检定法全部改为HPLC法。系统适用性试验主要考察理论塔板数和分离度，流动相pH值为8.0左右，要求选用耐高pH值的C18柱，并应控制柱温，用后注意及时对色谱系统的冲洗。
　　3、氨基糖苷类抗生素
　　氨基糖苷类抗生素共收载18个品种
　　（1）鉴别项下硫酸庆大霉素、硫酸新霉素等5个品种增加了IR法鉴别。
　　　（2）检查项下硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素注射液等8个品种增加了细菌内毒素检查，删减了热原、降压物质、异常毒性检查。硫酸安普霉素删减了妥布霉素检查。
　　（3）含量测定仍采用抗生素微生物检定法，但除另有规定外，检定可信限率由7％提高到5％。氨基糖苷类抗生素在CP2005、USP29中，部分品种采用了HPLC－ELSD法测定含量。
　　4、大环内酯类抗生素
　　大环内酯类抗生素共收载16种。
　　（1）鉴别项下除了硫氰酸红霉素、硫氰酸红霉素可溶性粉、乳糖酸红霉素和注射用乳糖酸红霉素外，均采用了HPLC法，个别品种还采用了IR法。
　　（2）检查项下吉他霉素、红霉素等12个品种增加了HPLC法的组分检查；吉他霉素及其盐、制剂的干燥失重改为水分测定；乳糖酸红霉素及其制剂删减了异常毒性和降压物质，增加了细菌内毒素检查。
　　（3）含量测定全部采用抗生素微生物检定法，与CVP2000和CP2005保持一致。
　　5、酰胺醇类抗生素
　　酰胺醇类抗生素共收载3个品种。
　　（1）鉴别项下增加了HPLC法。（试验过程中HPLC和TLC法可任选一项）
　　（2）检验项下增加了HPLC法进行有关物质检查。甲砜霉素粉的干燥失重限度由10.0％提高到8.0%。
　　（3）含量测定由原来的电位滴定改为HPLC法。
　　6、多肽类抗生素
　　多肽类抗生素共收载2个品种。
　　各项检测方法均与CVP2000保持一致。
　　7、林可胺类抗生素
　　林可胺类抗生素共收载3个品种。
　　（1）鉴别项与CVP2000保持一致，即采用HPLC法。在制剂的鉴别项下增加了氯化物的鉴别反应。
　　（2）检查项下删减了异常毒性和降压物质检查，增加了细菌内毒素检查，并且3个品种均要求进行林可霉素B的检查。
　　（3）含量测定与CVP2000保持一致，采用HPLC法。
　　8、抗寄生虫类抗生素
　　抗寄生虫类抗生素共收载伊维菌素、盐霉素钠、马杜米星铵及其制剂共6个品种。
　　（1）鉴别项下伊维菌素及其制剂删减了紫外鉴别，增加了IR鉴别，其它与CVP2000保持一致。
　　（2）检查项下伊维菌素的伊维菌素B1b改为伊维菌素组分；炽灼残渣由0.5%提高到0.1%，其他与CVP2000保持一致。
　　（3）含量测定与CVP2000保持一致。

（三）牢固掌握附录内容是执行好兽药典的保障
　　本版药典附录最大的改进在于对剂型分类及制剂通则的表述更加科学、严谨，有关内容，现就有关抗生素产品的内容再做进一步探讨。
　　目前，习惯把经化学改造的天然来源抗生素或微生物代谢的其它化合物，以低微浓度能抑制或影响他种生物机能的化学物质统称为抗生素。
　　抗生素药品的质量检验就是要控制抗生素成品中的杂质量及有效成分。
　　1、杂质检查法
　　由于抗生素多为微生物发酵产品，其中间产物或副产物往往会带入到产品中，因此进行抗生素产品中杂质的检查显得十分重要。目前采用的杂质检查法（包括有关物质、有关组分）主要有薄层色谱法、紫外－可见分光光度法、高效液相色谱法和分子排阻色谱法。
　　薄层色谱法??采用薄层色谱法进行杂质检查主要是限量检查，可采用标准品对照法和自身对照法。
　　紫外分光光度法??主要指在特定波长处，测定供试品溶液的吸光度，与相应的标准相比较。
　　高效液相色谱法??主要采用自身对照法和面积归一化法。
　　分子排阻色谱法??主要用外标法进行大分子聚合物的测定。如CVP2005第108页青霉素聚合物的测定。
　　2、生物检查法
　　目前，兽药检验过程中，所用的生物检查法主要包括热原检查、异常毒性检查、无菌检查、细菌内毒素检查、微生物限度检查等。本版兽药典收载的品种中，凡是能进行细菌内毒素检查，且规定了限度的品种，不再进行异常毒性和热原检查。
　　热原检查、异常毒性检查??主要是将供试品溶液注入动物体内，在规定时间内观察动物出现体温升高或者死亡等现象，来对药物的安全性进行评价。在CVP2005中，热原检查项规定实验室温度由CVP2000中的“17～28℃”调整为“17～25℃”，并在结果判定中补充“当家兔升温为负值时，均以0℃计”；异常毒性项下补充?“规定缓慢注射的品种可延长至30秒”。
　　无菌检查??系用于检查兽药典要求无菌的兽药制剂、原料、辅料、兽医医疗器具及其他品种是否无菌的一种方法。本版药典与上版药典相比，对无菌检查进行了如下描述：即若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查的检验场所也进行了相应的规定，要求在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行。新版药典对培养基、稀释液、冲洗液的制备、贮藏、培养时间进行了相应规定，且将所用培养基的名称进行了相应的改动。增加了方法验证试验，且对每一类药物无菌检查都做了相应规定，便于检验者操作。
　　细菌内毒素检查??本版药典规定，利用鲎试剂来检测的主要是由革兰氏阴性菌产生的内毒素，收载了凝胶法和光度法两种方法。对细菌内毒素检查用水进行了更为严格的规定。
　　微生物限度检查??本版药典对微生物限度检查操作环境和结果报告方式进行了改动，增加了验证方法，对各类产品的操作进行了规定，但对具体品种未做强制性检查。
　　3、抗生素药品含量测定
　　抗生素是一种生理活性物质，含量测定方法主要分为化学法、生物学法、仪器法。结合本版药典的内容，主要介绍生物学法和高效液相色谱法。
　　生物学法??用生物学方法测定抗生素含量的方法，常用的主要有管碟法和浊度法。
　　管碟法??是使用固体培养基，在培养基凝固前，将试验菌混进去，采用一定的方法，将含有抗生素的物质与含菌的培养基表面接触。目前，国际上采用将抗生素加入到特定的小钢管中，使小钢管中的抗生素与培养基表面接触，此方法称为“管碟法”。经过培养后，由于抗生素不断向培养基中扩散，凡抑菌浓度能到达之处，试验菌不能生长，从而形成透明的抑菌范围，此范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。由于抗生素药品的医疗作用主要是抗菌能力，管碟法是以抗生素对细菌或霉菌的抗菌能力作为客观指标来衡量抗生素的效力，其原理恰好与临床应用的要求一致，能直接反映出抗生素对微生物（细菌、霉菌）的杀死或抑菌能力大小。
　　管碟法主要有二剂量法和三剂量法。本版兽药典对各品种项下的可信限率作了更严格的要求。目前与国外药典保持一致，即除另有规定外，可信限率应控制在5％以内。这就要求从事抗生素检验的技术人员水平需进一步提高，特别是在铺菌层、钢管的同质性、双碟的选择、小钢管溶液的滴加等方面要认真摸索，规范操作。
　　浊度法??是将不同浓度的标准品及供试品，加到接有试验菌的液体培养基内，混匀，经过一定时间的培养（通常约为4小时）。经培养后观察试验菌生长混浊度，在光电比色计中测定透光率，浊度越大透光率就越小。比浊法不以试验菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和试验菌生长所致混浊度求得一定的比例，再由标准品的试验菌生长混浊度来推算供试品的效价。凡是能制成均匀悬液的微生物均可应用。因此，浊度法具有快速、灵敏度高、易操作、无扩散因素影响等优点。但这一方法往往因供试品中含有杂质，影响细菌生长，并且不适用于有色或混浊的供试品。
　　用浊度法测定抗生素效价，国外药典大都已采用，CP2005也收载了该方法，且硫酸庆大霉素注射液采用该法进行含量测定。本版兽药典参照CP2005仅收载了浊度法，但未收载具体品种，望各检验单位、生产企业对此方法做进一步的探索。
　　高效液相色谱法??随着科学技术的发展，在兽药检测领域中，HPLC法已相当普及。目前，常用的HPLC检测器有紫外检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器。本版兽药典涉及的品种主要用紫外检测器、示差折光检测器。CP2005中氨基糖苷类药物已采用蒸发光散射检测器检测，本版药典只收载了方法，氨基糖苷类药物仍采用微生物检定法进行含量测定。
　　HPLC法所要求的系统适用性试验主要包括理论塔板数、分离度、重复性（校正因子）、拖尾因子。结合抗生素的特点，日常检验过程中，应主要考察理论塔板数和分离度。
　　HPLC法用于含量测定主要采用外标法进行。在日常检测过程中，由于流动相多采用缓冲盐溶液，加之抗生素产品是发酵产品，会带入蛋白质等多种异物，对色谱柱的危害较大，使用时应注意对液相色谱的柱塞杆、密封圈的保养，对色谱系统应及时冲洗和保养。采用紫外检测器时还应注意考察溶剂及流动相在各紫外吸收波长范围内的吸收度大小。
　　三、本版兽药典存在的不足
　　1、虽然收载了比浊法，但由于未进行具体品种应用的考察，未收载执行此方法的具体品种。该法在CP2005中用于测定庆大霉素的检测。目前，BP、USP中均有采用，望各有关单位积极进行具体研究，并结合现代仪器的应用，制定检验操作规程。该法是采用标准曲线法，对生产企业进行半成品质量控制、提高检验效率、降低劳动强度均有实际意义。
　　2、本版兽药典中收载了质谱法，目前该法在兽药残留检测方面已经广泛应用，随着技术的发展，质谱法将更广泛地运用于新药安全评价、老药再评价、药物代谢动力学的考察等。
　　3、抗生素有关物质或者组分检查中，相对保留时间或者出峰的先后顺序应相对固定，除规定色谱条件外，还应标明色谱柱的品牌、规格、填料种类等，标准中还应附标准色谱图以示对照。
　　4、在细菌内毒素的检查法中，各品种项下规定的限值是参照CP2005而制定的，应结合兽药临床使用情况，做进一步研究。
　　5、本版兽药典中盐酸土霉素、青霉素类抗生素等基本完全参照CP2005修订。个别品种未参照国外药典使用的HPLC－ELSD法进行含量测定，以上项目仍需结合兽药实际，做进一步的研究。
　　6、澄明度检查法应参照CP2005,逐步用可见异物检查法代替，并需做进一步考察验证。
　　7、本版兽药典未收载缓释剂、颗粒剂、糊剂、乳房注入剂、阴道用制剂等新剂型品种。各科研单位，特别是各兽药生产企业应加大这方面的研究。另外，宠物专用剂型、规格未做充分的考虑。

我对您的敬仰有如滔滔江水连绵不绝