液相方法验证（准确度、精密度、线性、定量限、检出限）

应助达人

1. 先做定量限和检出限，确定最低浓度（进标品的浓溶液，查看它的信噪比，稀释浓溶液，直到信噪比等于3和10？）
检出限是空白溶液去做的，3倍标准偏差为仪器检出限；定量限一般是3倍仪器检出限。
2. 做线性：配混标溶液，包括五到七个点，最低的点是定量限浓度，最高的点把样品的浓度包进去即可，得标曲和r（这一步是要进样三次，求平均值吗？/线性的过程是不是就是在做标曲求样品含量？还是这是两个不同的部分？/这一步是不是不涉及算RSD，需要的数据只有标曲和r？）
进一次样就行，得出线性r。
3. 做回收率实验（1g样品+30mL 80%乙醇这是制备过程）：现在是1g样品+X mL混标+（30-X）mL 80%乙醇，混标配制三个浓度，按照1g样品中对应物质含量的80%、100%、200%加入（要在线性范围内），每一个浓度测三次，得回收率及回收率的RSD（因为样品中含量少，所以标品没法直接称重，打算配成溶液稀释后直接按体积加，不知道可不可以？）
可以，但不需要做3次。
4. 做精确度：制备六份样品，上午三次，中午三次，晚上三次，得日内精确度；分三天，一天三次，得日间精确度（这一步的RSD是算峰面积的，还是代入标曲之后，算含量的？）
应该是精密度？直接以含量来算RSD即可。
因为时间紧迫，所以想捋清思路之后赶紧做，用最短的时间争取一次性做出来，请问大家，我理解的这个流程对不对？

我的样品是枸杞，摸出来的方法定性了里面四种化合物，用外标法测定含量（这是不是就是做线性那一步？不用重复再测吧？），我看有人说用外标法测定的，回收率实验不用做加样回收，做回收率的就行，请问这是为什么呢？如果是做回收率实验该怎么做呢？回收率实验说是空白+标品，但我不太理解空白指什么......

回收率分空白加标回收和样品加标回收，比较有代表性的是样品加标回收。做法是：平行称取4个样品，两个不加标，两个加标液（可以按3里面100%的量去加）。上机检测得到不加标结果和加标后的结果。回收率算法=（加标后实际测量值-加标前实际测量值）/理论加标值*100%。

非常感谢您！

我看网上关于检出限是这样说的：进一针空白，再进一针标品浓溶液，在空白里面找到标品出峰的位置，做一个基线积分得出峰高，峰高的三倍对应的样品浓度就是检出限。这个感觉跟您说的意思好像是一样的

但我看标品的进样报告里面有信噪比这一项，我能不能不进空白，直接进标品，根据它的信噪比稀释，直到信噪比为3？

如果不行的话，想请问一下空白是指什么呢？我的样品用80%乙醇提取后，旋蒸用80%甲醇复溶进样，80%甲醇是空白吗？

关于回收率，您的方法跟我之前看的方法不一样，我又不知道该怎么选了......我不太明白您这个方法里面，做两个不加标和两个加一样含量的标品，是为什么呢？如果是做重复的话，不是要做三个吗？

麻烦您了！

应助达人

非常感谢您！

我看网上关于检出限是这样说的：进一针空白，再进一针标品浓溶液，在空白里面找到标品出峰的位置，做一个基线积分得出峰高，峰高的三倍对应的样品浓度就是检出限。这个感觉跟您说的意思好像是一样的
应该是找出空白对应位置的信噪比（不是峰高），3倍信噪比为仪器检出限。
但我看标品的进样报告里面有信噪比这一项，我能不能不进空白，直接进标品，根据它的信噪比稀释，直到信噪比为3？
这个工作量可能有点大。
如果不行的话，想请问一下空白是指什么呢？我的样品用80%乙醇提取后，旋蒸用80%甲醇复溶进样，80%甲醇是空白吗？
空白就是跟你曲线一样的试剂，只是不加标准样品进去。
关于回收率，您的方法跟我之前看的方法不一样，我又不知道该怎么选了......我不太明白您这个方法里面，做两个不加标和两个加一样含量的标品，是为什么呢？如果是做重复的话，不是要做三个吗？
一般平行样的话比较多是做2个，不排除有些标准会要求做3个平行样。这个我觉得不是主要问题。您不是要做回收率吗？样品加标和空白加标也是可以作为回收率的一种衡量方式。当然了，最好的衡量方式是您测试的样品类型一样的有证标准样品。
麻烦您了！

谢谢您！我明白了！

您好！

我最近做了方法验证，有个问题想再请教您一下

我一开始先做了五个点，做了标曲求了含量（比如1/2/3/4/5，浓度为0峰面积为0），因为做线性的时候，最低点的浓度应该是定量限浓度（比如0.01），那我能不能直接把定量限的浓度和峰面积加到标曲里面，而不是再重新按比例做？

就是这样：0.01 1 2 3 4 5，我算了算，直接加进去的r也是三个九的。能不能直接说在0.01-5之间有线性关系？

还是说，我应该重新选：0.01 0.05 0.1 0.15 ......（按比例一直到5），然后重新配了标液再做？

应助达人

标曲浓度不一定要最低点配定量限的，标曲的浓度应该按照样品的含量配置合适浓度的曲线。如果你的样品浓度在1、2、3、4、5这个范围内，不用配0.01那个点进去。

但是做线性的时候，不是要把最低浓度包含进去，然后得一个线性范围吗？（因为标曲是过原点的，但是浓度为0时的峰面积不是测出来的，所以不能说线性范围是0-5）我因为之前做了标曲，现在线性范围想直接把最低点补做了加进去，不知道可不可以？

还有就是，我算含量的时候是应该用过原点的标曲去算呢？还是用加了最低点浓度之后那个线性方程去算呢？因为我发现两个方程不一样

应助达人

你的方法验证有要求一定要加“定量限浓度”吗？我做气相和气质都不需要啊。

关于要不要过原点计算结果的问题，我的建议是如果您测的样品上机浓度在曲线范围内，那么久不要强制过原点；如果上机浓度很低，低于曲线最低点，那就强制过原点，不然可能产生负数结果。

嗯嗯 那可能有点不太一样，我之前听工程师的意思是要把这个浓度加上去，但是我没有仔细问该怎么加。

谢谢您！