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超高效液相色谱—串联质谱法测定中药材山药中30种农药残留

2020/09/21

私聊

液相色谱（LC）

超高效液相色谱—串联质谱法测定中药材山药中30种农药残留
张彩凤
（浙江捷岛检测科技有限公司，浙江杭州 310030）

摘要：建立了中药材山药中30种农药的超高效液相-串联质谱检测方法。样品中的农药残留化合物经乙腈提取，BRP固相萃取柱净化，采用 A：缓冲液（0.1 %甲酸溶液含5 mmol/L甲酸铵），B：乙腈-缓冲液（95：5）作为流动相进行梯度洗脱，多反应监测模式（MRM），分段时间窗口采集。30种禁用农药在2.5的线性范围内，线性良好，相关系数在0.9974～1.0000之间。在0.06、0.10、0.12 3个添加浓度水平进行了回收率试验，平均回收率61 %～108 %，相对标准偏差在0.24 %～8.11%（n=6）之间，各农药成分的检出限在0.11～5之间。该方法操作简单，灵敏度、准确度和精密度均符合多农残检测技术的要求，可为中药材中农残风险评估研究提供准确有效的数据支持。
关键词：超高效液相色谱—串联质谱；山药；农药残留
Detection of 30 pesticides residues in traditional Chinese medicine Dioscorea opposita by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric
Zhang Caifeng 270.0 *
5.87
70
20
197.2 ＞ 46.1
1.98
120
43
312.2 ＞ 236.1
5.87
70
22
3-羟基克百威
238.1＞ 181.0 *
2.18
75
17
苯线磷
304.3 ＞ 217.2 *
6.45
100
31
238.1 ＞ 163.2
2.18
75
18
304.3 ＞ 234.1
6.45
100
25
硫环磷
256.1 ＞ 140.0 *
2.84
85
35
灭线磷
243.2 ＞ 131.0 *
6.75
70
30
256.1 ＞ 168.1
2.84
85
22
243.2 ＞ 97.0
6.75
70
40
苯线磷亚砜
320.3 ＞ 171.1 *
3.11
110
31
特丁硫磷砜
321.2 ＞ 171.0 *
6.77
75
16
320.3 ＞ 292.1
3.11
110
21
321.2 ＞ 96.9
6.77
75
50
磷胺
300.2 ＞ 174.1 *
3.32
80
20
氯唑磷
314.2 ＞ 162.1 *
7.63
80
22
300.2 ＞ 127.1
3.32
80
25
314.2 ＞ 120.1
7.63
80
35
涕灭威
213.2 ＞ 89.0 *
3.4
30
24
蝇毒磷
363.2 ＞ 227.0 *
8.22
100
35
213.2 ＞ 116.0
3.4
30
16
363.2 ＞ 307.0
8.22
100
25
208.2 ＞ 89.0 *
3.4
30
24
甲基异柳磷
332.2 ＞ 273.1 *
8.27
50
8
208.2 ＞ 116.0
3.4
30
16
332.2 ＞ 231.0
8.27
50
17
甲磺隆
382.1＞ 167.2 *
3.95
100
25
硫线磷
271.1 ＞ 159.0 *
8.28
65
19
382.1 ＞ 199.1
3.95
100
30
271.1 ＞ 131.1
8.28
65
31
苯线磷砜
336.2 ＞ 188.2 *
4.04
100
37
地虫硫磷
247.1 ＞ 137.1 *
8.44
60
15
336.2 ＞ 266.1
4.04
100
30
247.1 ＞ 109.1
8.44
60
25
氯磺隆
358.2 ＞ 167.1 *
4.27
120
25
治螟磷
323.2 ＞ 171.2 *
8.5
77
18
358.2 ＞ 141.2
4.27
120
25
323.2 ＞ 115.0
8.5
77
40
克百威
222.2 ＞ 165.2 *
4.36
70
18
甲拌磷
261.2 ＞ 75.0 *
8.6
45
16
222.2 ＞ 123.0
4.36
70
30
261.2 ＞ 47.1
8.6
50
45

注：标注“*”为定量离子
2 结果与讨论
2.1 液相条件的建立
实验考察了流动相中缓冲盐浓度、梯度条件、流速对30种农药分析效果的影响。不同比例的缓冲盐浓度、梯度条件和流速，对各组分的响应值、分离度、保留时间以及峰型都有很大影响，随着缓冲盐浓度增加，各组分的响应值增加，当甲酸和甲酸铵浓度高于1.6中条件时，各组分的响应值无明显增加；随着流动相比例增加，各组分保留时间缩短分离度下降，部分组分响应值降低，当有机相比列降低，保留时间加长，峰型变宽，灵敏度下降；当增大流速时，出峰太快，组分分离度下降，当降低流速时，保留时间加长，峰宽变宽，灵敏度下降。
综合各因素考虑，流动相及梯度为1.6中条件时，30组分的灵敏度及分析效果最佳。
2.2 质谱条件的选择
实验考查了GAS1、GAS2、气帘气、碰撞气、DP电压、CE电压等参数对各物质响应值的影响，实验表明，1.6中的质谱参数化合物能够获得更高的响应值；为了消除复杂基质对检测灵敏度的影响，采用Schudled MRM监测方式，减少基质的干扰，大大提高了各待测组分的灵敏度和定量的准确性。30种禁用农残的加标图谱见图1、多反应监测色谱图见表4

图1 0.06 mg·kg-1 山药加标图谱

表4 多反应监测色谱图

化合物	离子对 (m/z)	色谱图	离子对 (m/z)	色谱图	化合物	离子对 (m/z)	色谱图	离子对 (m/z)	色谱图
甲胺磷	142.1 ＞ 94.0 *		142.1 ＞ 125.1		胺苯磺隆	411.0 ＞ 196.1 *		411.0 ＞ 168.1
涕灭威亚砜	207.2 ＞ 89.0 *		207.2 ＞ 132.1		甲拌磷亚砜	277.1 ＞ 199.0 *		277.1 ＞ 171.0
久效磷	224.2 ＞ 193.1 *		224.2 ＞ 127.1		内吸磷	259.1 ＞ 89.0 *		259.1 ＞ 61.1
涕灭威砜	223.2 ＞ 76.0 *		223.2 ＞ 86.1		特丁硫磷亚砜	305.3 ＞ 187.1 *		305.3 ＞ 97.0
涕灭威砜	240.2 ＞ 223.1 *		240.2 ＞ 86.2		甲拌磷砜	293.1 ＞ 171.1 *		293.1＞ 247.0
杀虫脒	197.2＞ 117.1 *		197.2 ＞ 46.1		水胺硫磷	312.2 ＞ 270.0 *		312.2 ＞ 236.1
3-羟基克百威	238.1＞ 181.0 *		238.1 ＞ 163.2		苯线磷	304.3 ＞ 217.2 *		304.3 ＞ 234.1
硫环磷	256.1 ＞ 140.0 *		256.1 ＞ 168.1		灭线磷	243.2 ＞ 131.0 *		243.2 ＞ 97.0
苯线磷亚砜	320.3 ＞ 171.1 *		320.3 ＞ 292.1		特丁硫磷砜	321.2 ＞ 171.0 *		321.2 ＞ 96.9
磷胺	300.2 ＞ 174.1 *		300.2 ＞ 127.1		氯唑磷	314.2 ＞ 162.1 *		314.2 ＞ 120.1
涕灭威	213.2 ＞ 89.0 *		213.2 ＞ 116.0		蝇毒磷	363.2 ＞ 227.0 *		363.2 ＞ 307.0
涕灭威	208.2 ＞ 89.0 *		208.2 ＞ 116.0		甲基异柳磷	332.2 ＞ 273.1 *		332.2 ＞ 231.0
甲磺隆	382.1＞ 167.2 *		382.1 ＞ 199.1		硫线磷	271.1 ＞ 159.0 *		271.1 ＞ 131.1
苯线磷砜	336.2 ＞ 188.2 *		336.2 ＞ 266.1		地虫硫磷	247.1 ＞ 137.1 *		247.1 ＞ 109.1
氯磺隆	358.2 ＞ 167.1 *		358.2 ＞ 141.2		治螟磷	323.2 ＞ 171.2 *		323.2 ＞ 115.0
克百威	222.2 ＞ 165.2 *		222.2 ＞ 123.0		甲拌磷	261.2 ＞ 75.0 *		261.2 ＞ 47.1

2.3 线性方程和检出限
在1.6分析条件下，对基质混合标液进行测定，对各化合物的质量浓度x（ng·mL-1）和定量离子的丰度y（counts）进行线性回归，用3倍噪声（S/N=3）对应的溶液浓度表示待测组分的方法检出限，30种农药的线性回归方程、相关系数及检出限见表5。
表5 线性回归方程及检出限

化合物	线性回归方程	相关系数（r）	检出限（μg ▪ kg-1）
甲胺磷	y = 1.11e+003 x + -279	0.9996	5.00
涕灭威亚砜	y = 1.79e+003 x + 9.58e+003	0.9990	2.00
久效磷	y = 1.43e+004 x + -1.29e+003	0.9999	1.00
涕灭威砜	y = 2.3e+003 x + -2.11e+003	0.9993	4.00
涕灭威砜	y = 2.32e+004 x + 5.87e+004	0.9982	5.00
杀虫脒	y = 2.03e+003 x + -694	0.9997	5.00
3-羟基克百威	y = 4.63e+003 x + -836	0.9998	2.50
硫环磷	y = 1.98e+004 x + -2.12e+003	1.0000	0.42
苯线磷亚砜	y = 1.04e+004 x + -5.92e+003	0.9998	0.87
磷胺	y = 2.73e+004 x + 2.09e+003	0.9999	0.56
涕灭威	y = 282 x + -65.4	0.9983	5.00
涕灭威	y = 1.44e+003 x + -544	0.9983	2.00
甲磺隆	y = 6.92e+003 x + -3.3e+003	0.9990	0.77
苯线磷砜	y = 8.26e+003 x + -4.59e+003	0.9998	0.77
氯磺隆	y = 226 x + -253	0.9980	5.00
克百威	y = 2.36e+004 x + -2.32e+003	0.9999	0.77
胺苯磺隆	y = 3.02e+004 x + -1.35e+004	0.9995	0.54
甲拌磷亚砜	y = 2.43e+004 x + 1.73e+003	0.9999	0.44

内吸磷	y = 310 x + -359	0.9986	4.00
特丁硫磷亚砜	y = 3.62e+004 x + 1.21e+004	0.9995	0.18
甲拌磷砜	y = 5.9e+003 x + 3.28e+003	0.9996	1.67
水胺硫磷	y = 949 x + 175	0.9998	1.67
苯线磷	y = 4.36e+004 x + 3.01e+003	0.9997	0.45
灭线磷	y = 1.78e+004 x + -112	0.9996	1.33
特丁硫磷砜	y = 8.04e+003 x + -2.23e+003	0.9992	0.91
氯唑磷	y = 5.27e+004 x + -1.13e+004	0.9998	0.11
蝇毒磷	y = 1.58e+004 x + -69.3	0.9996	0.49
甲基异柳磷	y = 4.93e+003 x + 2.57e+003	0.9974	0.61
硫线磷	y = 7.77e+004 x + 1.16e+004	0.9998	0.80
地虫硫磷	y = 1.23e+004 x + -4.32e+003	0.9997	1.00
治螟磷	y = 2.39e+004 x + -5.06e+003	0.9995	0.23
甲拌磷	y = 4.98e+003 x + -2.9e+003	0.9997	2.00

2.4 精密度与加标回收试验
按1.5方法对添加一定量30种混合农残标液的山药样品进行处理后，在1.6条件下测定，每个添加水平完成6次平行测定，进行加标回收试验，结果见表6。由表6可知，禁用农残的添加水平在0.06 mg▪kg-1、0.10 mg▪kg-1、0.12 mg▪kg-1时，平均回收率在61 %-108 %之间，相对标准偏差在0.24 %-8.11%（n=6），试验表明除了甲胺磷在低添加水平时回收率偏低外，其他29种农药的回收率及精密度均满足残留的分析要求。
2.5 样品测定
利用本研究对3个山药样品进行检测，30种农药均未检出。

表6 30种农药的精密度及回收率

化合物	添加量/（mg ▪ kg-1）			添加量/（mg ▪ kg-1）			添加量/（mg ▪ kg-1）
	0.06			0.10			0.12
	测定值/（mg ▪ kg-1）	RSD/%	回收率/%	测定值/（mg ▪ kg-1）	RSD/%	回收率/%	测定值/（mg ▪ kg-1）	RSD/%	回收率/%
甲胺磷	0.037	2.13	61	0.073	1.06	73	0.094	0.64	78
涕灭威亚砜	0.051	4.74	85	0.091	2.35	91	0.111	1.89	93
久效磷	0.054	1.86	91	0.094	0.95	94	0.116	0.52	97
涕灭威砜	0.054	2.59	90	0.094	1.21	94	0.115	0.70	96
涕灭威砜	0.051	6.21	85	0.090	3.20	90	0.109	1.49	91
杀虫脒	0.055	2.97	92	0.093	2.21	93	0.116	1.91	97
3-羟基克百威	0.053	1.66	89	0.091	1.36	91	0.113	1.07	94
硫环磷	0.057	0.98	96	0.096	0.80	96	0.120	0.75	100
苯线磷亚砜	0.059	1.13	98	0.101	1.10	101	0.124	1.54	103
磷胺	0.061	1.40	102	0.097	1.38	97	0.118	1.38	99
涕灭威	0.056	3.74	93	0.097	3.98	97	0.119	6.48	99
涕灭威	0.057	4.90	95	0.096	3.78	96	0.114	2.98	95
甲磺隆	0.052	2.58	86	0.093	2.11	93	0.114	1.98	95
苯线磷砜	0.061	1.40	102	0.100	1.15	100	0.123	1.41	103
氯磺隆	0.049	8.11	81	0.091	4.78	91	0.096	4.29	80
克百威	0.060	0.89	101	0.096	0.92	91	0.118	1.56	98
胺苯磺隆	0.052	2.68	86	0.093	1.67	93	0.112	1.35	94
甲拌磷亚砜	0.065	0.50	108	0.104	0.69	104	0.127	0.80	105
内吸磷	0.06	2.37	99	0.093	1.58	93	0.114	1.01	95
特丁硫磷亚砜	0.064	2.00	107	0.102	1.92	102	0.134	1.61	103
甲拌磷砜	0.064	1.70	107	0.101	1.56	101	0.124	2.64	103
水胺硫磷	0.057	3.53	95	0.097	2.25	97	0.117	2.16	97
苯线磷	0.063	0.98	104	0.099	1.25	99	0.117	1.46	98
灭线磷	0.064	0.84	106	0.102	0.51	102	0.120	0.42	100
特丁硫磷砜	0.064	4.77	106	0.105	2.79	105	0.126	2.35	105
氯唑磷	0.062	1.21	103	0.100	1.09	100	0.121	0.86	101
蝇毒磷	0.059	2.27	98	0.099	1.90	99	0.117	1.68	97
甲基异柳磷	0.06	5.97	100	0.089	6.22	89	0.106	7.18	88
硫线磷	0.059	0.96	99	0.093	0.24	93	0.112	0.36	93
地虫硫磷	0.958	2.93	97	0.094	1.04	94	0.115	0.17	96
治螟磷	0.961	0.78	101	0.099	0.66	99	0.119	0.35	99
甲拌磷	0.058	1.34	97	0.093	1.60	93	0.113	1.45	94

3结束语
建立了超高效液相-串联质谱法同时测定30种农残的检测方法，该方法前处理简单，分析时间短，专属性强，回收率良好，为中药饮片风险评估研究提供准确有效的数据支持。
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