LC-MSMS测定血浆药物浓度方法建立遇到的奇葩问题

应助达人

可能万古霉素不同浓度对内标物影响不一致，可以试着低浓度建一条曲线，高浓度再另外建曲线；另外万古霉素分子量大于1000，需要用双电荷准分子离子峰，可能对内标影响更大，比经常用的单电荷稳定性要差一些。

我这个线性范围参考了文献报道的定量下限与定量上限，报道中线性都很好，不知道为什么会有这样的问题。而且同一样品连续进样的误差也很大，峰面积的变异系数能达到8.24%，不过工程师说这正常，我很怀疑…这进样精密度偏差个人觉得有点大…严重影响结果…

应助达人

万古霉素分子量1000多，用双电荷准分子离子峰，液质响应一般，低浓度容易出现RSD偏大

qhyy(qhyy) 发表:我这个线性范围参考了文献报道的定量下限与定量上限，报道中线性都很好，不知道为什么会有这样的问题。而且同一样品连续进样的误差也很大，峰面积的变异系数能达到8.24%，不过工程师说这正常，我很怀疑…这进样精密度偏差个人觉得有点大…严重影响结果…

应助达人

图文并茂，不错的原创。

希望能引起讨论，解决问题

应助达人

先说峰面积变异系数哈，其实采用内标法的话再去单纯看峰面积变异系数就没太大意义，8%点几的峰面积变异系数其实真的是可以接受的，因为MS的额特性就这样，进样不是全部分析，雾化，碰撞，电离存在随机性。
第二个是线性关系问题，分俩部分，第一部分参考文献线性关系良好，自己做线性关系差（高浓度点响应值偏低），这个每个人做的环境条件，硬件条件等都不一样，变量因素太多，做不到一致是正常哈，文献大多是参考分析条件，色谱条件和方法，第二部分从自身分析方法角度去看你的线性关系差的话，其实想问一下自己有没有做个分析方法条件摸索，还是说只是照搬参考文献条件？MS端的分析条件不同仪器差异比较大，即使同一型号的都有差异，大部分都是要自己先测试，

当然没有照搬文献的条件，自己根据指南依据血药浓度设置了浓度范围，然后与文献对比了下，发是一致的。然后是关于条件摸索这一块，先是采用AB4500的Mass only进行了调谐，然后用针泵模式进行待测物和内标的质谱条件优化，确定好了各自的参数后，再采用LC-MSMS模式对液相条件进行了优化，然后再进行线性测试的。现在遇到的情况就是高浓度点下线性通不过。该情况在工程师培训时也遇到过，当时工程师用的自带柱子峰的对称性很好，没有通过以为是配样稀释问题。后来自己做，用的waters x-Bridge柱，对称性不太好，不过也能接受，线性到了高点通不过。前后两者对比，发现问题类似，都是到了高浓度点内标峰面积会增大约40%，因为不加内标算的话，线性是能通过的，加内标算的话线性反尔通不过了。
图中是定量上限下的总离子流图和待测物内标的峰。

通过分析数据发现，还是内标有问题，内标峰面积会随着待测物浓度增加而发生显著的增加，进而导致线性的不准确。

1.每个浓度点内标的加样量是否一致？
2.另外，进一下内标单标，看看内标里面是否存在未标记的分析物
3.从图中可以看出，你的内标浓度太低了，相应还不到E4，可以加大内标浓度再重新做标曲，内标浓度太低会影响标曲的线性