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【实战宝典】高压梯度洗脱与低压梯度洗脱有什么区别?
小官人
2021/03/22
私聊
液相色谱(LC)
解答:
梯度洗脱有两种实现方式:低压梯度(内梯度)和高压梯度(外梯度)。
(
1
)
低压梯度:
流动相在低压下混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱,因此对硬件的要求较低,其梯度的实现主要由电磁阀的开关来进行控制,只需一台泵、一台容积组织器和一台动态混合器,即可配置成四元梯度系统。优点是成本较低,系统的故障率较低,维护较为方便,此外,由于流动相是在常压下混合,不存在流动相的压缩,故而梯度准确度较好。缺点是精度比高压梯度略差。
(
2
)
高压梯度:
流动相的混合是在高压下进行,所以该系统在硬件上需多台同样的输液泵的组合,而后经动态混合器进行混合,并有专用的软件模块进行控制。优点是梯度精度较高,但缺点是成本较高,硬件较多;而流动相的可压缩性和流动相混合时的热力学体积的变化,可能影响输入到色谱柱的流动相的组成,所以,梯度的准确度会出现偏差,另外,高压梯度洗脱过程中为保证流速稳定必须使用恒流泵,否则很难获得很好的重复性结果。
(
3
)从硬件价格上看,高压比低压贵不少。两者最大的区别还是在流动相可能出现的气泡上。在同样的两种流动相混合时,高压混合所产生的气泡几率要比低压混合时少。在四元低压梯度系统中,在线脱气机在混合前先脱气,使气体远远低于其在溶剂中的饱和溶解度,混合后一般也不会达到其在混合溶剂中的最大溶解度,所以一般不会有气泡产生。混合后脱气是不可行的,因为混合后脱气,会在一定程度上改变混合比例(各种溶剂的饱和蒸气压不同决定)。另外,混合前脱气能提高流量精度,这点更有意义。而高压梯度是泵后混合,此时气体在溶剂中的溶解度会增大(溶解度随压力增大而增大),所以一般也不会有气体溢出而产生气泡了。
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