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【实战宝典】如何正确选择待测物质紫外吸收波长？

小官人

2021/03/23

液相色谱（LC）

问题描述：见图5-22，该化合物应该选择什么检测波长？是否尽可能取210nm、220nm这样的整数波长？另外254nm的波长为什么很常见？

图5-22某组分最大紫外吸收波长谱图

解答：（1）选什么波长看你的检测目的和对灵敏度的要求，同时还有兼顾杂质等其他物质的吸收波长，以及流动相的紫外吸收截止波长。一般选择的是最大吸收波长，如果最大吸收波长有干扰，就选次波长，要综合考虑目标物响应和基线。

（2）从图5-22可以看出，目标物紫外最大吸收波长为216nm，但是考虑到216nm接近不少有机相的紫外吸收截止波长，所以可能造成梯度洗脱时基线波动较大，噪声比较高，相同浓度条件下待测物信噪比不一定比次吸收波长261nm处高，而336nm处目标物紫外吸收波长较261nm处低很多，灵敏度较低，综合考虑建议采用261nm的波长作为最佳选择。

（3）254nm对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收，对饱和基团也有弱的吸收，而对反相色谱常用的甲醇、乙腈的透过率很高，一般作为通用波长使用。

（4）关于问题里面提出的波长选择是否尽可能取整数？目前应该没有这种要求。

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