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安捷伦液相残留峰的来源判断

遗忘曲线

2021/08/08

液相色谱（LC）

残留，就是进空白样品的时候，和目标物质保留时间相同的时间有峰出现。这种现象会对我们的检测工作带来很大的影响，因此残留问题一旦出现，消灭它也就是迫在眉睫的事情。

一、通过No Injection来判断残留来源

1、残留的类别

可能有的实验员会说残留的本质来源肯定是样品进样，所以只需要把注意力集中在自动进样器就可以了。实际上由纯粹进样引入的残留往往趋势是越打越低，但也有一些残留非常顽固，怎么进样都有，响应还忽高忽低，这个时候往往要考虑的是某些地方被污染了，这种情况通常存在以下特点：两通做没有，色谱柱做有；等度没有，梯度有；高比例水相时间越长，残留峰越高；这种残留峰也可以叫做污染峰，若保留时间飘忽不定，和你的目标峰的保留时间不一致的话就是传说中的鬼峰了，它的排查过程也和下面介绍的思路一致。首先要先做一个No Injection来去判断。注意，残留和污染问题可能需要进样3-5针来去确认结果。

2、去除进样器No Injection之残留依旧

何谓No Injection？顾名思义即单纯的运行一个梯度方法，没有任何进样和切阀动作。

我们一般建议先将进样器去除，即将进样器的进样阀的1号和6号毛细管线拧下来，并用两通进行连接，运行No Injection进样。由于去除进样器的原因，保留时间会有所提前，因此液质用户一旦使用Dynamic-MRM方法的话请直接保持仪器的正常连接进行No Injection，否则会导致误判。不同的软件No Injection的执行略有区别：Masshunter是进样位置项目下拉直接选择No Injection，其他版本的工作站可以直接将样品位置留空。

六通阀

如果这个时候你的残留峰依然存在，一般考虑流动相、溶剂瓶、脱气机、泵、管线、色谱柱的原因。往往我们会重点怀疑水相，因为若水相一路中含有污染物，水相比例高的情况下在色谱柱是无法被洗脱下来只能被富集的，后期有机相比例升高就会导致峰被冲出来，若污染物和你的目标峰性质非常接近，就可能会非常巧合的出现在你目标峰的保留时间那里，造成残留的现象，这种情况在液质用户中较为常见。值得一提的是流动相中的添加剂的质量也很关键，若它们有问题，也就是意味着流动相被污染。

1、更换不同批次的水，或者购买一瓶纯净水或蒸馏水，可以直接将管路插入新的瓶中，以此来排除溶剂瓶污染的可能性，此时添加剂可先不加，若残留消失的话可再添加进去进行测试；更换有机溶剂。

2、换一根色谱柱试一试，虽然概率相对偏小。

3、还有就是延长梯度洗脱时间，让污染物尽可能的从色谱柱和管路当中被洗脱干净，防止吸附，也可以有效避免迟滞峰的出现。

4、泵与自动进样器之间添加捕集柱
这种污染往往很难解决，尤其对于液质用户，高灵敏度的同时也会比单纯的紫外检测器更容易受到影响。所以可以尝试在泵和自动进样器之间加一根捕集柱。这根柱子起到的作用是让来自流动相或泵的污染物先在这根捕集柱上富集，随后被洗脱出来的时候就会和通过进样过去的目标物的保留时间错开，达到消除残留干扰的目的。

1) 尽可能选取短柱并和分析柱类型类似，需要对你的目标物有所保留；

2) 需要你的泵的耐压足够（如大A家的1290系列泵），不能超压，对延迟体积要求高的用户不宜使用这个方法；

3) 若空白残留峰提前后干扰到了其他的目标峰则不适用此方法。

2、去除进样器No Injection之残留消失

若泵后直连色谱柱No Injection后残留峰消失了，就可以将仪器恢复原样（进样器接回），再做一次No Injection，若残留峰再次出现了，就要怀疑进样器mainpass流路中的某一部分受到污染了，如计量泵等。此时可先行查看金属毛细管线的接头是否满足要求，如下图所示，接头有问题也有可能会造成残留。

二、去隔垫空气进样—残留消失

若恢复原样No Injection的结果是残留消失，那么问题肯定出在进样系统，那么我们首先排除进样小瓶有没有问题。我们将瓶子的隔垫去除，并进样空气。若残留消失了，那么说明隔垫或者空白溶剂有问题，此时再加入空白溶剂去瓶垫进样，残留依然消失的话说明瓶垫有问题，残留出现的话说明空白溶剂有问题。

三、进样程序切阀进样—残留依旧

若去隔垫进样空气的结果是残留依然存在，那么就要重点考虑我们的进样器三兄弟了-针、针座、转子。如果我们想要进一步细分的话，可以如下图设置进样程序进行实验。我们只让进样阀进行了切换，针和针座并没有什么动作，这种情况下的结果若是残留依旧，那么怀疑对象就是转子。我们此时就需要拆出进行超声清洗。

四、进样器的维护

若进样程序只切阀后残留就消失了，那么针和针座就是我们的重点怀疑对象了

1、延长洗针时间或更改洗针溶剂

洗针溶液一般由水和甲醇的混合溶液组成，为使洗针效果更好，可使用针对残留物质溶解性更好的洗针溶液，或者改变水和甲醇的比例；可针对酸性化合物添加适量的甲酸（0.1-0.2%）。

2、反冲针座和针，也可尝试超声清洗

如果您不熟悉针座的拆除流程，可以直接将进样阀的1号位、6号位的毛细管线交换位置，来进行针座、针的反冲。若您可以将针座拆下来，可以接到柱温箱的后面，根据污染物的性质选择溶解度好的流动相，且可以升高温度进行高温冲洗。最后也可将针座和针进行超声清洗或者直接进行更换。

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