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液相DAD不出峰，常见和不常见的原因都在这里

myoldid

2021/11/23
好好学习

液相色谱（LC）

液相不出峰是色谱分析中较为常见的问题，本文从以安捷伦1260 DAD检测器为例，目标化合物有紫外吸收的情况下，分析可能遇到的常见和罕见原因。

以下是从泵，进样器，柱子，检测器和软件依次排序

1. 无压力，没关闭排空阀或者泵头进空气不能吸液。比如上一次实验没正确的设置瓶填充，流动相被吸干，泵头进空气，那再次使用时，即使进行了排空操作，泵也可能没吸入流动相，没压力，不出峰。常见指数★★★★★

2. 错误的流动相，常见的是流动相通道与流动相液体不匹配。比如原A通道是甲醇，因其他原因装成了水，导致流动相不匹配，不出峰。常见指数★★★★☆

3. 流动相配置错误，使用了错误的试剂配置流动相，流动相pH没调节正确（常见于用pH试纸调节），流动相比例设置错误，导致不出峰。常见指数★★★★☆

4. 错误的样品瓶，在软件站中设置了错误的样品位置，进样错误不出峰。常见指数★★★★★

5. 错误的样品，常见于样品称取错，稀释倍数不对，样品分解析出，分层。常见指数★★★★☆

6. 没设置样品瓶位置（为空）或者进样量设置为0，没进到样，不出峰，常见指数★★★★☆，见图1

图1

图2

7. 样品量太少，低于0.5mL，进样器吸不上液，不出峰。这可能出现在同一样品多次进样时，液面降低发生。常见指数★★★★☆

8. 错误的柱子，色谱柱与方法不匹配。比如需要SAX柱子，缺没确认柱子，直接使用原仪器上的C18柱子，不出峰。常见指数★★★★☆

9. 氘灯能量不足，虽然灯能开启，自检能通过，但在所需波长下，氘灯能量不足，此时基线可能出现波动，导致不出峰。常见指数★★★★☆

10. 系统有微漏，化合物并未进入到流通池，流通池有污染，破裂，常见指数★★★☆☆

11. 未开灯，如果在方法中取消选中了“检测所需的灯已开启”，那此时检测器直接就绪，由于没开灯，所以不出峰，而且基线很平。常见指数★★★☆☆，如图3

图3

12. 检测器没正确连接。比如DAD与FLD/RID串联时可能出现。上一实验使用了FLD，而且是柱温箱出来的管线直接连接FLD，没经过DAD，使用完毕后没接回DAD。此时仪器不报错，也没任何异常，导致不出峰。常见指数★★☆☆☆，如图4

图4 红色为实际流路，黄色为DAD流路，黄色流路并未接入系统

13. 检测器设置了时间程序，比如方法所需波长为220nm，目标化合物在10min时出峰，但该方法是在另一方法上修改而来，原方法的时间程序是在7min时切换波长到320nm，也就是说在7min后，仪器的实际波长是320nm，这样导致不出峰。常见指数★★★☆☆，如图5

图5

14. 假象，工作站量程设置的太大，比如峰高本来只有10mAu，但在线工作站设置成了1000，此时峰高就很低，误以为没出峰。另外工作站信号调用错误，比如只调用了压力信号没调用吸光度信号，误以为没出峰。常见指数★☆☆☆☆

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灵犀

第1楼2021/11/24

谢谢楼主的分享

0

灵犀

第2楼2021/11/24

这个好用，给我上去

0

myoldid

第3楼2021/11/25

应助达人

欢迎大家指正，补充

0

dadgoh

第4楼2021/11/25

应助达人

感谢分享！

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zyl3367898

第5楼2021/11/28

应助达人

很实用的经验，收藏了。

0

hxh949122532

第6楼2021/11/29

感谢分享实用经验，收藏了

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