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正相手性分析峰形改善分享

viki

2021/11/23
R队

液相色谱（LC）

（一）背景：

分析某项目中控反应液（样品状态为淡黄色固液混合物）前期无法得到很好的峰形，但对照品峰形比较好，经过一些列的排查最终找到了影响峰形的原因并解决了此问题。

（二）问题呈现

取样品溶液适量用稀释剂稀释至10mg/mL（稀释剂为：正己烷：乙醇=1；1），发现峰形、保留时间均不是太理想。

消旋体（定位用，纯度很高）同样如此。

（三）原因分析与排查

出现此类现象的主要原因可能由以下四点造成：

1 溶剂效应

2 色谱柱

3 流动相

4 样品

之后逐一排查：

1降低进样量，峰形未有明显改善，且采用DAD扫描，分裂的两个峰紫外吸收曲线也明显不一致，故排除溶剂效应。

2 对色谱柱进行排查：连续进几针消旋体（定位用，纯度很高），发现峰形逐针改善。

猜测色谱柱中有某些物质引起峰形变化，且该物质可被冲洗掉。后用Hexane：EtOH=70：30冲洗色谱柱约一个半小时。平衡后进对照品，出峰与标准图谱一致。

故确定色谱柱、流动相、仪器等无问题。

后继续进样，样品出峰依然不正常。紧接着样品进消旋体，发现出峰也不正常。

最终确定问题出在样品上。

（三）问题解决

和工艺人员沟通后，得知样品中有原料消旋体、成品和乙醇钠。

分析此结构，为酸性化合物，乙醇钠为碱性，尝试往流动相中加入0.1%的甲酸。

冲洗约半小时后进样，标准品出峰正常，样品峰形有极大改善，但还是和正常的图谱还是对应不上。

后来与技术人员交流得知，样品需经过前处理。处理方式为用酸调pH至2~3，MTBE萃取，拉干。以尽可能减少样品中组分对检测的影响。

处理后的样品为黄色粘稠液体，方法可重现。

（四）总结：

酸性化合物测手性时，碱性条件下，峰形较差。在酸性的流动相体系下，峰形尖锐。测酸性化合物的手性时，若峰形异常，可用酸性流动相冲洗后，再尝试。

影响化合物峰形不单单是流动相一个因素，样品溶液的pH同样会影响峰形。确保流动相、溶液pH和化合物的酸碱性一致才能得到很好的峰形

研发阶段，在检测时发现峰形等异常，一定要和工艺人员密切沟通及时了解样品性质。切勿脱离工艺自行开发分析方法。

更多精彩内容可关注公众号“研发分析之路”

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zyl3367898

第1楼2021/11/28

应助达人

样品前处理很重要，要不进样后无法定量。

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