流动相的PH

应助达人

调节流动相pH 的依据就是该化合物的pKa，pKa 主要影响的是溶液中化合物的解离状态。
对于反相液相色谱来说，通过调整流动相的pH，使目标化合物以非解离的状态存在溶液中。此时，化合物的水溶性降低，在反相色谱柱上可得到更好的保具更高的色谱分离度。
对液质分析来说，可以通过调整流动相pH使化合物处于解离状态，此时化合物以离子状态存在于溶液中，有利于离子的形成并获得更高的质谱响应。在调节流动相 pH 时应避免在该化合物的 pKa 附近，因为如果pH等于该化合物的pKa，那么该化合物是处于50%的解离状态，这时流动相pH发生微小的变化，都会引起样品保留时间的较大变动，导致方法的耐受性变差。pH在分析物pKa正负2以内的范围就是该色谱方法的不稳定区域，应尽量避免。当pH在分析物pKa正负2 以外时，方法保留的重现性及耐受性更好。此时还要考虑色谱柱的PH耐受范围。

应助达人

楼主，这个主要因为不同的色谱柱的ph耐受范围是不一样的，ph过高或者过低都会损伤柱子；另外，ph对峰形也会有影响，所以液相流动相要调节ph。
遵循的原则主要是抑制溶质离子化，反相液相色谱中，常向含水流动相中加入酸、碱或缓冲溶液，使流动相的pH值控制在一定数值，抑制溶质离子化，减少谱带拖尾，改善峰形，以提高分离选择性。

谢谢，如果合适，可以用纯的甲醇水作流动相吗，这些都是是中性的吧？我们老师说一般用的很少？

应助达人

是中性，不常用的原因是在中性条件下色谱峰容易拖尾，由于在中性pH 条件下硅胶表面的硅醇基可能发生离子化而带负电荷，然后会发生离子交换作用使带正电荷的碱性离子保留更强，导致峰展宽或峰拖尾。这种情况在低pH 条件下不会发生，这也是反相色谱中酸性流动相更适合分离离子型化合物的原因。

选色谱柱的时候，看中性条件下阿米替林测试的峰形拖尾因子，峰形好的，分析碱性化合物峰形好。

首先要确认目标物在水中的电离状态，例如乙酸会电离成乙酸根离子与氢离子；

假如目标物是酸，流动相的pH值一般调整到酸性；假如目标物是碱，流动相的pH值一般调整到碱性；

为什么要调整流动相的pH值？由于目标物在水中会发生电离，形成阴离子与阳离子，用乙酸举例，形成的乙酸根离子，在色谱柱的填料中难以得到充分的吸附与解吸，导致出来的峰会拖尾，电离出来的乙酸根离子的量越大，拖尾越严重，强度越低；当把流动相的pH值调整到酸性的状态，由于氢离子在水中的浓度增加，氢离子与乙酸根离子结合形成乙酸分子的反应更趋向于形成乙酸分子，溶液中的乙酸根的量会减少，因此，在这种乙酸分子状态下，色谱柱的填料可以把乙酸分子有效地分离，形成的峰形会对称而且强度高，峰形显得高而瘦；

至于pH值应该调整到具体哪个数值，要根据目标物的电离常数而定，用下式求出氢离子浓度，再换算出pH值。

跟色谱柱的范围有关

应助达人

流动相是否需要添加酸，与待测物质的化学性质有关系。


如果待测物质在流动相中容易电离，例如弱酸性物质 ，那么保留会比较弱。

如果流动相添加酸，可以抑制其电离，那么就会改善保留。

这种情况下就需要流动相添加酸。