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【分享】液相色谱系统的日常维护及注意事项

樱桃小丸子

2007/04/07

液相色谱（LC）

(一)高压恒流泵的维护注意事项
泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。应采取下列措施以延长使用寿命：
绝对不允许在没有流动相的或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。
每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲的溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。
要用HPLC级试剂
输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。
压力下限应设置在0.5~1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞的干磨
有柱后清洗功能的高压恒流泵还要注意保持清洗液，否则将失去柱后清洗效果。
(二)流动相使用的注意事项
必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45µm薄膜过滤。
过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。
几种脱气方法比较：
1、氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。
2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。
3、抽真空脱气法：易抽走有机相
4、超声脱气法：一种较为常见的脱气法。流动相放在超声波容器中，用超声波震荡10~15 分钟，此法效果并不太好但操作简单。
如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相：
浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜
特别注意HPLC使用过后的系统清洗：
含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：
1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。
此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗
2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。
3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。
如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。
(三)流动相的更换
在分析过程中，有时需要更换流动相进行分析。一定要注意前一种使用的流动相和所更换的流动相是不是能够相溶。如果前一种使用的流动相和所更换的流动相不能够相溶，那您就要特别注意了。要采用一种与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相进行过滤、清洗。
较为常用的过滤流动相为异丙醇，但实际操作中要看具体情况而定，原则就是采用与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相。一般清洗时间为30~40分钟，直至系统完全稳定。
如不进行以上“特别注意”上述步骤的操作，将会导致系统管路阻塞。严重时将引起流通池污染堵塞，不得不更换流通池。用户就要承担不必要的损失了。
储液器的注意事项：
保持流动相储液器的清洁是保证仪器正常使用的关键。要使用HPLC级的溶剂，对试剂含有缓冲盐及非HPLC级的流动相一定要用0.45µm过滤器除区去其中的微量物质。

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flower_1982

第1楼2007/04/07

谢谢，有更具体的吗？

0

zengxiaoliang

第2楼2007/04/30

非常好的东西，我怎么会错过呢。谢谢啦！！！！！！！！！！！

0

meixiaoxia

第3楼2007/04/30

多谢分享，这里的意见对我检测非常有用

0

9910xiao

第4楼2007/05/02

谢谢，有更具体的吗？
谢谢，有更具体的吗？

0

懿切瀡緣

第5楼2007/05/12

好东西啊！
学习
知道Ｃ18的柱子用１０柱体积冲色谱柱的多少毫升吗？
知道的告诉一下好吗！谢谢了

0

njdcz

第6楼2007/05/17

谢谢分享你的体会。

0

lypagela

第7楼2007/05/17

有个地方需要探讨一下
“含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法”第二步应该是用95/5的水/甲醇冲洗整个系统，lz可能是笔误吧？如果直接用95%的甲醇去冲，盐肯定很快就析出了。
另外补充一下，如果待测样品没有用流动相溶解的话，要注意测试一下，可能溶解好的样品在流动相中会析出，堵塞色谱柱头。
例子：以前做一个项目，样品居然只能溶解在DMSO里，然后流动相用的甲醇/缓冲盐，结果样品进柱子就析出，即使样品浓度很小也不行，最后的解决方式是将样品衍生化了

0

剑神一笑

第8楼2007/05/17

看鸟就回，做人要厚道

0

老庆仔

第9楼2007/05/17

谢谢,正需要这方面的东西!

0

sabrina2007

第10楼2007/05/17

很有用。还有没有工作中遇到的具体问题拿来分析一下呢?

0

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