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新手求助,液相标准品出峰问题

  • Ins_862f5f42
    2022/03/17
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 流动相是乙腈和0.1%磷酸水,
    空白溶剂是50%甲醇水

    对照品为6种标准品的混标:
    分别跑了初始5%,10%,20%,到50%盐的梯度,倒过来的梯度也跑了,都是只有3分钟前出一个大峰和多个连在一起的小峰。

    还分别跑了20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%乙腈的等度都跑了 除了等度50%的在3分钟后有出峰,其他的都在3分钟前出大峰和一些小峰。随着乙腈增加,峰是有微小的前移变化,但是都在3分钟前出峰。

    文献中查到的标准品色谱条件,分别有乙腈从5%10%20%逐步梯度到50%, 跑30分钟,出峰时间都适中在10~20分钟左右。

    然后昨天也另外完全按其中一个单标国家药典的方法(除了溶剂不同,药典是乙醇,我们是50%甲醇水)跑了一针,也是只有2分钟左右的空白溶剂相同的大峰。

    多种方法跑的空白溶剂,出的大峰,是在2.4分钟左右出现。

    看了出峰的柱效,没有超过3000的,大多在1000左右。
    这是色谱柱的问题吗,还是流动相ph的影响,会影响那么大吗,怎么调都分不开,像色谱柱完全没有保留能力。怀疑过是不是样品配的有问题,从头重新配了一个单标试了一下,出峰时间面积峰型都一样,一样的两分钟出峰。
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  • xiaolanzi5

    第1楼2022/03/17

    应助达人

    具体说说用的什么色谱柱,跑的什么标品。

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  • 安平

    第2楼2022/03/17

    应助达人

    楼主详细说说具体的分析情况为好,具体分析什么物质?具体分析条件?有图么?


    样品可以先进样浓度较大的,梯度可以先选择洗脱能力较弱的。

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  • Ins_862f5f42

    第3楼2022/03/18

    是C18柱子,跑过0.2mg/ml浓度的,也跑过20ug/ml的,单标混标都跑过,梯度从磷酸盐5%梯度到50%,都是只有2分钟左右的峰,物质是极性小分子物质,中药相关的。

    安平(byron1111) 发表: 楼主详细说说具体的分析情况为好,具体分析什么物质?具体分析条件?有图么? 样品可以先进样浓度较大的,梯度可以先选择洗脱能力较弱的。

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  • Ins_862f5f42

    第4楼2022/03/18

    是C18柱子,跑过0.2mg/ml浓度的,也跑过20ug/ml的,单标混标都跑过,梯度从磷酸盐5%梯度到50%,都是只有2分钟左右的峰,物质是极性小分子物质,中药相关的。

    xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:具体说说用的什么色谱柱,跑的什么标品。

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  • Ins_862f5f42

    第5楼2022/03/18

    只用过这个柱子,之前一直以为是梯度设置问题,然后设置了各种等度梯度,都是只有2分钟左右3分钟前的峰。还没来得及换柱子试试。

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  • Ins_862f5f42

    第6楼2022/03/18

    说错了,是5%乙腈到50%梯度

    Ins_862f5f42(Ins_862f5f42) 发表:是C18柱子,跑过0.2mg/ml浓度的,也跑过20ug/ml的,单标混标都跑过,梯度从磷酸盐5%梯度到50%,都是只有2分钟左右的峰,物质是极性小分子物质,中药相关的。

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  • Ins_862f5f42

    第7楼2022/03/18

    色谱条件大概如图,除了是0.1磷酸盐。

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  • Ins_862f5f42

    第8楼2022/03/18

    色谱条件如图

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  • Ins_862f5f42

    第9楼2022/03/18

    图好像看不清,色谱柱:HC- C18柱;流动相:A相为乙腈溶液,B相为质量分数0.1%的磷酸溶液,采用梯度洗脱30min,乙腈与磷酸溶液体积比从5:95至50:50;波长:330 nm;流速: 1 mL/min; 柱温: 30 °C;进样量:10μL。

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