流式原理荧光部分

应助达人

荧光激发原理：

光照射到某些原子时，光的能量使原子核周围的一些电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道，即从基态跃迁到第一激发单线态或第二激发单线态等。第一激发单线态或第二激发单线态等是不稳定的，所以会恢复基态，当电子由第一激发单线态恢复到基态时，能量会以光的形式释放，所以产生荧光。

荧光是物质吸收光照或者其他电磁辐射后发出的光。大多数情况下，发光波长比吸收波长较长，能量更低。但是，当吸收强度较大时，可能发生双光子吸收现象，导致辐射波长短于吸收波长的情况发生。当辐射波长与吸收波长相等时，即是共振荧光。常见的例子是物质吸收紫外光，发出可见波段荧光，我们生活中的荧光灯就是这个原理，涂覆在灯管的荧光粉吸收灯管中汞蒸气发射的紫外光，而后由荧光粉发出可见光，实现人眼可见。
每一种荧光分子都发射某一特定波长范围内的光，然而这些荧光的发射光谱会发生重叠，有时这种重叠现象非常显著。比如说FITC、PE 、Cy5-PE，PE-TR

荧光补偿原理

为了能够同时检测这三种发射光信号，我们只能通过合适的滤光镜来选择性地采集某一特定波长范围内的光，既图中的灰框。FITC，我们选用530/30滤光镜，既这种滤光镜能够收集515-545nm范围内的光波。然而，我们选用的任何一种滤光镜都不可能仅仅收集一种荧光染料的发射光，比如FITC有一部分发射光进入到我们用来收集PE的区域，因此， 在FL2通道上采集的光不仅仅有来自PE的，还接受到一部分FITC的发射光信号；具体来说，我们必须将FL2荧光通道收集的光信号中属于FITC的那一部分减去，才能确切地知道PE的发射光到底是多少。那么这种调节的过程就是我们所谓的荧光补偿。

2。 荧光补偿的方法

大体来说，有2种补偿方式，仪器补偿或者软件补偿

请问，为什么530/30对应就是FITC不是别的呢，这个跟FITC本身的激发和发射光谱有关系吗，还是和什么有关