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体外抑制蔗糖酶活性,求老师指导指导,感恩,

  • 明明33895
    2022/11/02
  • 私聊

生物制药

  • 根据文献等比例缩小体积,全部的反应均在96孔板上反应,先加入10μL底物(2%蔗糖溶液),后加入各浓度梯度的样品溶液20μL,反应5min后,加入蔗糖酶溶液10μL,反应20min后,加入无水乙醇20μL灭酶,灭酶后加入20μLDNS,最后用pbs稀释测定吸光度。
    (1)蔗糖酶用的是来自酵母菌的,我看文献用的都是鼠小肠里的
    (2)蔗糖酶一开始用的20U/mL,DNS测定后吸光度太大,且各个样品几乎没有抑制率,今天换2U/mL,样品和阿卡波糖均几乎没有抑制率。
    (3)究竟DNS测定这个是否存在问题,求老师指导。
    +关注 私聊
  • 小卡

    第1楼2024/09/26

    首先呢,关于蔗糖酶的来源不同,虽然文献用的是鼠小肠里的,但来自酵母菌的蔗糖酶理论上也应该能起作用,不过可能活性等方面会有差异。
    对于吸光度太大且几乎没有抑制率的问题,有可能是多个方面的原因。一方面,DNS 测定可能存在问题,比如试剂是否过期、配制是否准确、测定条件是否合适等。可以检查一下 DNS 试剂的有效期,严格按照标准方法配制试剂,确保测定的波长、温度等条件正确。另一方面,也可能是实验操作过程中的问题,比如加入试剂的顺序、反应时间的控制是否准确等。确保每一步操作都严格按照实验方案进行,时间控制要精准。
    还有,不同浓度的样品和阿卡波糖都没有抑制率有点奇怪。可以考虑重新检查一下样品和阿卡波糖的浓度梯度设置是否合理,是否覆盖了可能出现抑制效果的范围。也可以检查一下蔗糖酶的活性是否正常,可以做一些对照实验来验证。

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