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峰拖尾常见原因及应对方法
xiaolanzi5
2022/11/22
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液相色谱(LC)
液相色谱
峰拖尾的原因有很多,常见的有:
1、 HPLC体系中存在过大的死体积,导致一部分的分析物在这些空间里滞留过长的时间而表现为拖尾。这种拖尾是对于每一个色谱峰都存在的,因此当出现每个色谱峰都拖尾时,有可能就是这个原因。以前就遇到过这个问题,仪器增加了一个模块,死体积增加,峰又胖又拖尾。
应对方法:更换更短、内径更小的管路;检查部件的连接是否紧密;检查保护柱或者在线过滤器的安装是否合适(这个尤为常见);换到表现正常的仪器排查下是否是色谱柱的原因等。
2、在HPLC柱中存在两种或以上的吸附位点,这两个位点与分析物作用的非均一性。有的固定相表面存在大量低能量吸附位点,这种吸附位点与分析物的作用是非选择性的,包括色散或者简单的极性作用。有的固定相表面同时存在少量的高能吸附位点,这种吸附位点与分析物的作用是有选择性或者特异性的,包括氢键作用、离子交换作用和螯合作用等,不同吸附位点作用力不同导致峰拖尾。
应对方法:通过改变流动相条件(如添加剂,pH值等)或者针对性地更换色谱柱来减少拖尾。
3、色谱柱过载。当样品进样量过大,使色谱柱出现过载时,色谱峰也会表现出拖尾。特别是带电荷的化合物时,当保留在固定相上时会因为静电排斥而大大降低其载样量。
应对方法:可以通过降低进样量观察峰形是否改善来确定是否是过载导致的峰拖尾。对于由于带电荷的化合物,可以通过调节pH值(比如把化合物调至中性状态)或者加入离子对试剂来改善峰形。
4、色谱柱柱头污染或筛板部分堵塞。这样导致分析物分子中的一部分滞留时间增加从而导致拖尾。
应对方法:这种情况一般表现为色谱图的所有色谱峰都出现拖尾,可以通过更换同款色谱柱来排查或者反接色谱柱(如果确定色谱柱可以反接)观察峰形是否改善来判断。
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