SiO2-DMOA色谱柱分离磷脂
标准品
不同类别的磷脂结构上的差异主要表现为头部基团极性的差异,在分离时主要采用正相色谱模式。基于SiO2-DMOA色谱柱具有反相/亲水混合模式保留特性,首先采用不同类别的磷脂标准品考察SiO2-DMOA色谱柱对混磷脂样品的分离选择性。如图示,以具有相同烷基侧链的磷脂DPPG、DPPE和DPPC为样品,能够在10 min内实现共洗脱,其出峰顺序依次为DPPG、DPPE和DPPC。
图 混磷脂标准品在SiO2-DMOA色谱柱上的色谱分离图
进一步将SiO2-DMOA色谱柱应用于不同PC种类的分离。如图所示,以甲醇/乙腈(40/60,v/v)为流动相,DMPC、DPPC和DSPC在17 min内实现基线分离,且峰形良好,并没有明显拖尾现象。DMPC、DPPC和DSPC的差异主要表现为两条酰基侧链含碳数目的不同,它们尾部含碳数目分别为13、15和17。因此3种PC在SiO2-DMOA色谱柱上的洗脱顺序依次为DMPC、DPPC和PSPC。
图 混PC在SiO2-DMOA色谱柱中的分离谱图
SiO2-DMOA色谱柱分离大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜磷脂提取物
基于SiO2-DMOA色谱柱对磷脂大类和磷脂类别的良好分离性能,以大豆卵磷脂提取物为实际样品,进一步探究SiO2-DMOA色谱柱对复杂磷脂样品的分离性能。以A/甲醇(50:50,v/v)为流动相的色谱分离图,大豆卵磷脂的分离是采用正相色谱条件下进行,从图中可以观察到在12 min内,可以观察到10个色谱峰,显示了良好的分离性能。
图 大豆卵磷脂在SiO2-DMOA色谱柱上的色谱分离图
此外,以肺腺癌细胞膜磷脂提取物为样品,对其分离的色谱条件与大豆卵磷脂一致,考察了SiO2-DMOA色谱柱对肺腺癌细胞膜磷脂提取物的分离性能。如图所示,肺腺癌细胞膜磷脂提取物在12 min内大致可观察到11个色谱峰。上述结果证实SiO2-DMOA色谱柱对复杂磷脂样品也同样具有良好的分离选择性。
图 肺腺癌细胞磷脂提取物在SiO2-DMOA色谱柱上的色谱分离图