药动中国药典标准9012

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2024/09/22

私聊

液相色谱（LC）

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按照药典的生物样品定量分析原则，我有问题想请教各位老师

1、药代动力的残留效应和稀释可靠性需要做吗？我看大部分文献上都没做，但是药典上有，不知道是不是只有药物分析才做

2、方法学最后有一个质量控制，要求检测未知生物样品时，每一个分析批都要包含一条标曲，三个质控样品双份，质控样品至少＞检测生物样品的5%，然后根据指控样品的RSD是否符合标准去判断这一个分析批里的生物样品能不能用。

什么是一个分析批？是精密度那种批内批间的意思吗？
一天以内做完的算一个分析批？按照每个分析批至少六份的质控样品又要>5%，每个分析批要有120个待测生物样品？五组大鼠就算每组10个采血点的血浆，那也只有50份

3、标曲至少有三条

是不是可以和第二点连起来，一天内算一个分析批，连着做三天就是三个分析批，然后每天都要用空白血浆＋标准品做标曲，再做6个质控样品吗？
质控样品也是要和标曲一样用空白血浆做吗？

4、血浆处理时的药物浓度计算

如果用纯甲醇配置100ug／ml的标准品储备液，再逐步稀释成50，25，12.5，6.25，3.125，1.5625浓度的系列标准工作液

血浆样品处理方式：
100ul给药血浆＋100ul甲醇乙腈1:1＋50ul内标＋20ul乙酸＋10ul磷酸二氢钾溶液，涡旋混合后离心
（条件有限不能氮吹复溶也不能做质谱）

制作标曲时，是不是也和上面的血浆处理一模一样？
100ul空白血浆，＋上面配置好的梯度浓度工作液＋100ul甲醇乙腈1：1＋50ul内标＋20ul乙酸＋10ul磷酸二氢钾溶液，涡旋混合后离心

那这种情况空白血浆和其他体积的液体不会再稀释一次标准工作液吗？相当于本来体积有280ul的情况下再加入工作液，计算的时候是忽略不计还是按照配置的梯度浓度去算还是要考虑体积影响？
每一个梯度浓度的标准工作液在空白血浆里的加入体积应该设置多少比较好？
内标的浓度和加入体积是不是没有强制要求？

5、准确度也要和精密度一样批内批间都要做吗？
准确度是不是就是回收率？我看药典上没有提到回收率，但是所有文献里都做了
那还需要再做那种方法回收率（相对回收率），绝对回收率（提取回收率）吗？
有的是用空白基质做的，有的是用超纯水，每个计算方法也不一样，还有的是加样回收
不知道有没有什么常用做法或计算方法？

6、准确度精密度除了质控样品，定量下限也要同时进样五份取同步做吗？

7、质控样品可以和标准曲线是同一个储备液吗？直接从标曲里选低中高三个浓度，还是必须和标曲浓度错开

8、稳定性和耐用性必须要做吗？

9、血浆杂峰有300-400mAU的信号值，待测物只有1mAU，只有放大纵坐标到0-5才能看见峰，但是放大以后看不到基线，宽宽胖胖的占据整个屏幕看不到其他东西了，但是信噪比自己的选后面一段时间对比有16，这种情况能使用吗？

（信噪比是不是只能选峰前后1分钟以内才可以？处理界面信噪比自选有16，但是最终导出数据的时候信噪比报告又变成了0.095）

导出图像数据的时候是整体和局部都打印出来吗？

9、我的血浆含药量很低，我做标曲前是不是要估算一下定量限和样品浓度范围？
处理方式
100ul给药血浆＋100ul甲醇乙腈1:1＋50ul内标＋20ul乙酸＋10ul磷酸二氢钾溶液，涡旋混合后离心
可不可以这样理解
已知浓度A的内标50ul，和已知浓度B的检测物标准品100ul，按照上面的处理方式，给药血浆换成空白血浆，进样以后分别得出内标和标准品的峰面积CD，标准品信噪比为30

然后我再换成给药血浆，加入浓度A的内标50ul，不加入标准品，其他条件都和上面一样，分别得出内标和标准品的峰面积EF

相当于定量限就是B再稀释三倍的浓度，后续所有给药血浆出峰时的信噪比都要大于定量限，并且浓度也要＞定量限浓度才可以

D/B=F/未知浓度，用这个公式带进去算F对应的浓度吗？
然后取一只老鼠的完整时间点血浆，去算大概浓度范围，再去做标曲

问题有点多，是我这段时间对比文献和药典，再加上实际测试所不理解的地方，希望有老师看到能帮忙解答一下，不胜感激