发帖人:holmes8519
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问题描述:
如何对土壤样品中的羧酸和醛进行衍生化处理?
解答:
对于衍生化反应有以下要求:
1.衍生化反应既迅速又完全,便于计算衍生物的含量及定量计算;
2.衍生反应的生成物在分析过程中性能要稳定;
3.衍生剂、衍生产物和衍生副产物容易分离。
对于醛类的衍生化,用DNPH进行衍生化符合以上要求,且操作简单。依据《土壤和沉积物 醛、酮类化合物的测定 高效液相色谱法》(HJ 997-2018), 参考步骤如下:
取100 mL待衍生化溶液,加入4 mL缓冲溶液(pH≈3),加入6 mL衍生剂(ρDNPH=3.00 mg/mL),置于恒温振荡器中,40℃振荡1 h。
图4-1 DNPH衍生化反应原理
对于羧酸类的衍生化,BSTFA:TMCS(99:1)是最常用的硅烷化试剂之一,硅烷化反应也全部满足以上要求。参考步骤如下:
在吹干的提取物残渣中加入100 μL的BSTFA:TMCS(99:1),加入50 μL的吡啶。衍生化小瓶加盖后在60 ℃衍生化30 min,视化合物而定。衍生化后可直接进样1-2 μl。
残渣吹干无水分,十分关键,衍生化试剂BSTFA遇水立即分解。在南方潮湿季节进行这一反应时,特别要注意防潮。
图4-2硅烷化反应原理