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噬菌体展示技术流程、原理及九大问题解析

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2023/05/10

生命科学仪器综合讨论

噬菌体展示技术流程、原理及九大问题解析

原理：噬菌体展示技术，是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。基于噬菌体展示抗体库构建和筛选的专业知识，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。

噬菌体展示技术流程：

噬菌体抗体库开发技术包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州利用灵活的筛选策略、多种筛选方法以及上清介入检测，筛选的成功率达到90%，可根据客户的特殊需求构建不同物种的噬菌体抗体库，并提供全面高效的抗体发现服务。

①义翘神州的噬菌体展示平台可以针对哪些种属的抗体进行开发？

目前可以对小鼠、兔子、鸡、人等多个种属的抗体开发进行建库。

②义翘神州的噬菌体展示库建库库容有多大？

免疫库的库容在5×108~2×109，天然库的库容可以达到1011。

③义翘神州的噬菌体展示库筛选抗体的多样性如何？

根据不同要求，可以提供十几个到上百个unique hits。

④义翘神州噬菌体展示库抗体开发周期需要多长时间？

免疫库从建库到获得质粒需要8周时间，天然库需要6周时间。

⑤义翘神州噬菌体展示库及其筛选出的克隆可以保存多久？

均可保存一年以上。

⑥怎样衡量一个库的好坏，有哪些标准？

除了库容大小，还可以通过电泳判断插入率，以及通过一代测序验证抗体构建的正确率，评估抗体库的真实库容。或通过二代测序，获得库的序列多样性和覆盖率等具体信息。

⑦淘洗时筛选到非特异抗体怎么解决？

被动的方法是利用负筛，尽快能去掉非特异克隆。主动的方法是更换免疫原，选择不仅免疫原性好且活性好、特异性强的免疫原。

⑧淘洗过程中，如何判断淘洗是否可以终止？

有多种途径可以判断，比如通过计算噬菌体淘洗前后的产出和投入比、将每轮淘洗的克隆测序观察序列是否出现富集、以及将噬菌体库检测ELISA等。

⑨如何筛选到亲和力高的抗体？

可以尝试降低抗原包被量，同时增加洗涤力度。

更多详情可以关注：噬菌体抗体库技术平台https://cn.sinobiological.com/services/platform/phage-display

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