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【转帖】液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节

quguohua

2007/04/27

液相色谱（LC）

高效液相色谱具有分离效率高、分析速度快和应用
范围广等特点,特别适合于高沸点、大分子、强极性和热
稳定性差的化合物的分离分析。目前高效液相色谱已成
为化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科
领域中重要的分离技术,是分析化学家和生物化学家手
中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可
少的工具之一。虽然在检测分析中使用了昂贵的、性能
优越的高档精密仪器,但是由于在样品的前处理,标准溶
液的制备,样品液的测定,分析中的污染,仪器常见故障
等等问题上的不注意,而引起大的系统误差,使整个测定
分析失败。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意
的几个环节,作简要分析,以达到更好的检测效果。
1 　样品预处理方法
样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、
溶解、稀释等步骤外,样品需要: ①过滤; ②萃取; ③衍生
化(柱前衍生) ; ④液相色谱(低压柱层析) 。这些操作可
以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是
除去干扰物、增加检测器灵敏度(富集) 、保护色谱柱等。
样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障,其中样品
萃取是关键的一步,要从大量的干扰物中萃取出微量组
分难度极大。
有些样品经预处理后还不能作进样分析,需进行衍
生化处理,使一些无紫外吸收或无荧光的组分,经过衍生
化后能用紫外和荧光检测器检测,这样既提高了灵敏度,
又改善了分离度(质量变化) 。样品预处理的同时也会带
来一些问题,如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完
全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确
度,或者在整个样品预处理过程中带来误差。
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒,
有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备
上柱前应对准光线摇动,检查样品溶液中有无颗粒。只
要看到颗粒、混浊或乳化,就应过滤一下,过滤膜要能截
留住015μm 以上的颗粒,样品过滤的过程中可能引起:
样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量,样品溶剂挥发引起误差。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离
出被分析的组分,或者减少损坏柱的物质(如蛋白质等)
和干扰物。一般采用有机溶剂萃取,要求萃取用的溶剂
毒性低、挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度
且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲
烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直
接进样,有时需要浓缩或吹干浓缩,再用定体积的液体或
流动相溶解进样。这样增加了样品浓度,提高了灵敏度,
同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。在萃取是要考虑样
品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外,还有
用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下:
111 　水溶性样品
(1) 酸性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂
质后调成酸性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下
吹干,用适当的溶剂解后进样。
(2) 碱性组分及生成的盐萃取方法:有机溶剂萃取杂
质后调成碱性,再加有机溶剂萃取或进样,或在N2 流下
吹干,用适当的溶剂溶解后进样。
(3) 中性组分萃取方法:有机溶剂萃取杂质后,直接
用反相色谱法分析。
112 　脂溶性组分萃取方法:有机溶剂萃取或进样,或在
N2 流下吹干,用适当的溶剂溶解后进样。
2 　分析中的污染
一般检测的环境、容器、试剂都是影响测定结果的因
素。
211 　环境污染
仪器室的有害气体、气溶液、灰尘等等都能造成污
染,影响检测结果,这种污染很难校正。因此,仪器室与
其他实验室应隔离,保持清洁,仪器室内应安装空调,注
意防潮、防腐、防震、空气相对湿度应小于70 %为宜。
212 　容器
实验室常用的器皿有玻璃类、瓷类、石英类、塑料类
等,在进行分析时,应按照待则样品的要求来选则器皿,
不管使用哪种器皿,容器的洗条清洁都是很重要的,也是取得好的检测结果的基本保证。
213 　试剂
在液相色谱分析中,所选用的试剂必须是色谱纯、优
级纯或分析纯,如果用含量有杂质的试剂,则会出现杂峰
而影响测定结果。
3 　标准溶液的配置
在配置标准溶液时,先要配置现定浓度的内标溶液,
在标准溶液和样品溶液中最好使用同一批次配制的内标
溶液以减少误差。
(1) 配制标准溶液的物质应当是色谱纯的、性质稳
定。
(2) 常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保
存。
(3) 在配制维生素类标准品时,要放置在棕色容量瓶
中或避光放置以免分解。
4 　样品预处理过程中的主要故障与解决办法
(1) 色谱图中出现无关的峰,原因有可能是样品过滤
器带来污染,解决方法如下:
①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验; ②改变
过滤器类型; ③采用交替清洗技术。
(2) 一些或全部化合物的峰比预期的小,尤其是低浓度的样品,原因可能是样品过滤器表面吸附下降,解决方
法如下:
①改变过滤器类型; ②严格按相同条件处理所用样
品; ③采用交替清洗技术。
(3) 回收率太低或差,原因可能是萃取不完全,解决
方法如下:
①增加萃取时间,使用热溶剂; ②修改清洗方法。
(4) 色谱峰变宽,柱寿命缩短,原因可能是样品带来
的干扰与污染,应改进清洗方法。
(5) 精度差,原因可能是回收不完全,解决方法如下:
①改进或替换衍生化、分离、萃取或其他条件; ②用
自动化处理装置提高精度。
总之,对分析仪器来说,避免故障的最主要的做法是
正确的操作和调节,切忌盲目操作,对核心部位如离子
室、微电流放大器等减少震动和碰撞,保证绝缘,并减少
各种系统误差要注意以上要点,但还要注意日常的仪器
保养,色谱柱子的维护,仪器室保持清洁,这样才能使液
相色谱处于最佳工作状态,在分析中发挥其重要的作用。

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pesticide313

第1楼2007/04/27

不错，好好学习。

0

fluent26

第2楼2007/05/03

谢谢楼主，辛苦了

0

mzcdream

第3楼2007/05/07

太好了，感谢！

0

zhouk2006

第4楼2007/06/13

谢谢！！！

0

long-sky

第5楼2007/06/13

多谢，我正好有急用

0

071010

第6楼2007/06/20

谢谢楼主，辛苦了

0

linruxu

第7楼2007/09/16

谢谢楼主，辛苦了

0

wbyyqirui

第8楼2007/09/18

学习一下，谢谢了

0

jeccy_jin

第9楼2007/09/20

看着好费劲

0

amazing_3

第10楼2007/12/05

谢谢，学习了~

0

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