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国标5750莠去津的波长问题

Insm_a280307d

2023/08/29

液相色谱（LC）

国标以及部分文献用的是254nm波长，但是我自己摸的条件是220nm有最强吸收，甚至10倍于254nm，然后部分文献也确实是用220nm的。造成这个区别的原因是什么呢？我的机器是waters acquity UPLC，超高压液相，柱子是最常见的BEH c18柱，检测器是PDA。有没有可能PDA和UV检测器对同一种物质的最佳检测波长有区别？

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通标小菜鸟

第1楼2023/08/29

应助达人

在选择波长的时候不是说最大吸收波长就是最佳的，特别是你用的是watersUPLC，检测器灵敏度很高，你如果用最大吸收波长，浓度很小响应就很高，很容易造成检测器过载，特别是高浓度样品会出现平头峰。所以在选择波长的时候还是要看这个物质在检测器上的实际响应，不是每一个物质都选最大吸收波长，对于响应很高的物质，可以选择中等吸收波长，254nm较220nm有一个好处是背景噪音小，越是高波长，越不容易受溶剂等背景吸收干扰，在响应足够满足测试要求的时候，选择其次的吸收波长才是最佳。

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myoldid

第2楼2023/08/29

应助达人

你有PDA检测器，就可以提取一下莠去津的紫外吸收曲线，应该可以看到220nm和254nm都有吸收而且220还高于254.但是220nm只是比乙腈190、甲醇205大了点点。选用254nm就可以完美避开截止波长以及溶剂不纯，从而减小基线噪声。PDA和UV检测器对同一种物质的最佳检测波长是没有区别的，但是PDA和UV对同一浓度的物质，响应确实不同。我们用的安捷伦VWD和DAD对同一浓度的物质检测，VWD会高一些，这可能和灯能量有关

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Insm_a280307d

第3楼2023/08/29

谢谢，我也这样想过，主要是响应值差得太多，有些不太理解
通标小菜鸟(v3141805) 发表:在选择波长的时候不是说最大吸收波长就是最佳的，特别是你用的是watersUPLC，检测器灵敏度很高，你如果用最大吸收波长，浓度很小响应就很高，很容易造成检测器过载，特别是高浓度样品会出现平头峰。所以在选择波长的时候还是要看这个物质在检测器上的实际响应，不是每一个物质都选最大吸收波长，对于响应很高的物质，可以选择中等吸收波长，254nm较220nm有一个好处是背景噪音小，越是高波长，越不容易受溶剂等背景吸收干扰，在响应足够满足测试要求的时候，选择其次的吸收波长才是最佳。

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Insm_a280307d

第4楼2023/08/29

谢谢，最初是3D数据选出220最高的，主要是比国标254高了10倍以上，有些不理解
myoldid(v2963297) 发表:你有PDA检测器，就可以提取一下莠去津的紫外吸收曲线，应该可以看到220nm和254nm都有吸收而且220还高于254.但是220nm只是比乙腈190、甲醇205大了点点。选用254nm就可以完美避开截止波长以及溶剂不纯，从而减小基线噪声。PDA和UV检测器对同一种物质的最佳检测波长是没有区别的，但是PDA和UV对同一浓度的物质，响应确实不同。我们用的安捷伦VWD和DAD对同一浓度的物质检测，VWD会高一些，这可能和灯能量有关

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