应助达人
酸水解法测定脂肪
强酸与样品一同加热进行水解,结合或包藏在组织里的脂肪可游离出来,然后用乙醚和石油醚提取脂肪,回收溶剂,除去溶剂后即为脂肪含量。
工具/原料
?
1、100 mL具塞刻度量筒。
2、烘箱。
3、95%乙醇。
4、乙醚(不含过氧化物)。
5、石油醚(30~60℃沸程)。
6、浓盐酸。
方法/步骤
1
?样品处理
?????? a.固体样品:准确称取约2.0 g,置于50 mL试管中,加8 mL水,混匀后再加10 mL浓盐酸。
?????? b.液体样品:准确称取10.0 g置于50mL试管中,加10 mL,浓盐酸。
2
水解
????? ?将试管放入70~80℃水浴中,每隔5~10 min用玻璃棒搅拌一次,至样品脂肪游离消化完全为止,时间约需40~50 rain。水解过程中,如水分蒸发,应适当补加水,保持溶液总体积不变,以避免酸浓度升高。
3
提取
?????? 取出试管,加入10 mL乙醇,混合。冷却后将混合物移人100 mL具塞量筒中,用25 mL乙醚分次洗试管,洗液一并倒人量筒中。加塞振摇1 rain,小心开塞放出气体,再塞好,静置12 min,小心开塞,用石油醚一乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置10~20min,待上部液体澄清,吸出上清液于已恒重的烧瓶内,再加5 mL石油醚一乙醚等量混合液于具塞量筒内,振摇,静置后,仍将上层乙醚吸出,放人原烧瓶内。
4
回收溶剂、烘干、称重
?????? 回收烧瓶内乙醚后,将烧瓶于水浴上蒸干后,置100~105℃烘箱中干燥2 h,取出放进干燥器内,冷却30 min后称重,反复干燥冷却操作至恒重。
END
注意事项
?1、测定的样品需充分磨细,液体样品需充分混合均匀,以使消化完全。2、水解后加的乙醇可使蛋白质沉淀,促进脂肪球聚合,同时溶解一些碳水化合物、有机酸等。后面用乙醚提取,因乙醇可溶于乙醚,故需加入石油醚,降低乙醇在醚中的溶解度,使乙醇溶解物残留在水层,并使分层清晰。3、挥干溶剂后,残留物中若有黑色焦油状杂质,是分解物与水一同混入所致,会使测定值增大,造成误差,可用等量的乙醚及石油醚溶解后过滤,再次进行挥干溶剂的操作。4、因磷脂在酸水解条件下分解为脂肪酸和碱,故本法不宜用于测定含有大量磷脂的食品如鱼类、贝类和蛋品。此法也不适于含糖高的食品,因糖类遇强酸易碳化而影响测定结果。