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基于液质联用仪(LC-MS/MS)测定农作物中松柏醇、松脂醇、落叶松脂素

  • Ins_b1807d29
    2023/10/30
  • 私聊

液质联用(LCMS)

  • 基于液质用仪(LC-MS/MS)测定农作物中松柏醇、松脂醇、落叶松脂素

    仪莹12孙莹璐12张丽娜12

    (1.中国农业科学院 作物科学研究所 重大平台中心,北京 1000892.中国仪器仪表学会科学仪器设备验证评价中心(生命科学站),北京 100089)



    摘要: 用超高效液相色谱-串联三重四杆质谱法(UPLC-MS/MS)检测农作物中的松柏醇(CA松脂醇(Pin)、落叶松脂素(Lar,色谱柱为Agilent SB C18 RRHD检测柱温为40初始流动相为乙腈=41,按5mM的量加乙酸铵,检测流速为0.3mL/min,其检出限分别为1.25~ 5. 10 μg/L,定量限分别3. 75~ 15. 60 μg/L,满足农作物中CAPinLar同时检测的要求。

    关键词:超高效液相色谱-串联质谱;松柏醇松脂醇落叶松脂素;农作物

    Determination of CA, Pin and Lar in crops based on LC-MS/MS

    Yi Ying12 , Sun Yinglu12,Zhang Lina12

    (1.Major Platform Center, Institute of Crop Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100089, China; 2. Scientific Instruments and Equipment Verification and Evaluation Center of China Instruments and Apparatus Society (Bioscience Station))



    AbstractUltra-performance liquid chromatography-tandem triple quadrupole mass spectrometry (UPLC-MS/MS) was used to detect CA, Pin and Lar in crops. The chromatographic column was Waters Acquity Agilent SB C18 RRHD, the temperature of the detection column was 40℃, the mobile phase consisted of acetonitrile:water =4:1, and 5mM ammonium acetate was added. The detection flow rate was 0.3 mL/min, the detection limits were 1.25-5.10 μg/L, and the quantification limits were 3.75-15.60 μg/L, respectively, which satisfied the requirements of simultaneous detection of T6P and Tre in crops.

    Keywords: UPLC-MS/MS; CA; Pin; Lar; crops



    1 引言

    1997Lewis等首次提出DIR蛋白广泛存在于植物体内,参与并指导木脂素生物合成过程中位置的选择和立体选择,这类具有dirigent结构域的蛋白就引起了科学家的广泛关注。为了了解木脂素在不同农作物组织中含量的差异,我们通过HPLC-MS/MS平台对木脂素代谢途径中的母核化合物CAPinLar进行含量测定[1,2]

    2 材料和方法

    仪器与试剂:谱育EXPEC5210重四液相色谱联用仪(UPLC5210元高压输液泵、自动进样器、柱温箱、质谱仪)、电子天平(BSA224S型,赛多利斯科学仪器有限公司产品),KQ-250E型超声波清洗器 (昆山禾创超声仪器有限公司产品)PICO17型离心机(美国赛默飞公司产品)



    乙腈(色谱纯,美国赛默飞公司产品),乙酸铵(纯度≥98%,德国CNW 公司产品) T6PTresigma-aldrich贸易有限公司,质谱用水为屈臣氏蒸馏水。

    分析条件:色谱柱:Agilent SB C18 RRHD Column (100 mm×2.1 mm,1.8 μm)柱温40 ℃,进样体积5 μl,流动相:A:乙腈 B:5 mM乙酸铵-水,流速0.3ml/min

    0min 20A%

    1 20A%

    5 80A%

    5.1 20A%

    7 20A%



    离子源:电喷雾离子源;扫描方式:负离子切换扫描;检测方式:质谱多反应监测(MRM) [3];优化的质谱条件见表1

    1 LarCAPin的质谱多反应检测质谱参数



    化合物 母离子(m/z) 子离子(m/z) 锥孔电压 碰撞能


    Lar 359 329.1 50 10


    CA 179.2 146164 50 15


    Pin 357 151136.1 50 20


    3 结果与分析

    3.1线性范围与检出限

    Agilent SB C18 RRHD色谱柱检测时,Lar的质量浓度为7.25 μg/L14.5 μg/L72.5 μg/L145 μg/L290 μg/L725 μg/L1450 μg/L, CA的质量浓度为8.65 μg/L17.3 μg/L43.25 μg/L86.5 μg/L173 μg/L 346 μg/L865 μg/L1730 μg/LPin的质量浓度为8.23 μg/L16.46 μg/L82.3 μg/L164.6 μg/L329.2 μg/L823 μg/L1646 μg/L;按照优化后的色谱条件对每个点重复测定3次。以质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,以标准曲线的第一个和最后一个点的质量浓度作为线性范围。

    不同浓度梯度的LarCAPin通过C18柱时在线性范围内呈现良好的线性关系;系数均在0. 99 以上,均符合实际分析的要求[4]

    1 Lar标准曲线

    2 CA标准曲线

    3 Pin标准曲线

    2 LarCAPin标准曲线、线性范围、决定系数、检出限和定量限



    化合物 标准曲线方程 线性范围(μg/L) 相关系数 检出限(μg/L) 定量限(μg/L)


    Lar y422.9818x 7.25-1450 0.9996 1.25 3.75


    CA y33.6037x 8.65- 1730 0.9996 5.10 15.60


    Pin y9433.8945x 8.23- 1646 0.9998 3.59 10.77


    3.2实际样品的测定

    用建立的方法测定40份小麦类样品,部分样品的色谱图如图4所示。

    4 小麦叶片中LarCAPin的色谱图



    且同一批次样品3次平行样得到T6PTreRSD 值小于3%,如表3所示,说明前处理方法可行,仪器的稳定性良好[5]

    3 小麦叶片中LarCAPin的测定值



    分别对小麦不同组织的样本进行前处理提取实验,前处理方法简便可行,仪器性能可靠,满足对样品中松柏醇、松脂醇、落叶松脂素的检测。

    参考文献

    [1] 周海旭. 樟树叶中木脂素提取分离及其生物活性研究[D]. 2017.

    [2] 戴清源,朱秀灵,刘皓. 芝麻木脂素及其生物活性研究进展[J]. 农产品加工.学刊, 2012, (1):16-21.

    [3] Du, Bingyuan, et al. Phillygenin exhibits anti-inflammatory activity through modulating multiple cellular behaviors of mouse lymphocytes[J]. Immunopharmacology and immunotoxicology, 2019, 41(1): 76-85.

    [4] Murata, Jun, et al. Oxidative rearrangement of (+)-sesamin by CYP92B14 co-generates twin dietary lignans in sesame[J]. Nature communications, 2017, 8(1): 1-10.

    [5] Hano, C, et al. Pinoresinol-lariciresinol reductase gene expression and secoisolariciresinol diglucoside accumulation in developing flax (Linum usitatissimum) seeds[J]. Planta, 2016, 224(6): 1291-1301.
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