开始之前,先了解一下定量的方式有哪些:
1定量的方式
校准曲线的目的是为了准确的计算样品的含量,那么常用的定量方式有两种:外标法和内标法。
外标法比较简单,就是通过样品的面积和标样的面积相比较从而计算出样品的含量
而内标法是通过向标样中加入固定浓度的内标,计算内标和标样的比值从而计算出样品的含量,这两种方式的选择会在后面几期中写到。
2单点线性和两点线性
校准曲线的选择有很多,经常用到的是线性方程(Linear),如方程1:
y是峰面积,x是浓度,m是斜率,b是截距
如果过原点,就可以表示为方程2:
方程2经常用于单点线性,如果样品的浓度比较稳定,都是集中在某个浓度点附近,那么就可以选择一个浓度与样品浓度接近的标样,用单点线性定量。譬如医药产品某种物质含量的测定,这种物质的含量要求都是一致的,那么就可以用单点线性
方程2同样也可以用于两点线性,如果样品浓度范围比较窄,变化范围不超过一个数量级,那么就可以选择两点线性。
3多点线性
多点线性针对样品的溶度范围比较宽,Table 1的例子是一个多点线性,线性从1ng/ml到1000ng/ml,共10点
如果选择线性过原点,线性的方程是y=0.9975x,如果选择线性不过原点,线性的方程是y=0.9963x+0.8101
同时也给出了这两种方程下每个浓度点的偏差
4过原点还是不过原点
是否选择过原点就是选择要不要让截距b等于0,如果截距b接近原点,那么就可以选择过原点,这个接近程度该如何计算呢 ?
以table1为例,计算了截距b的标准偏差SD是0.5244,如tale2所示:
其中1.4134是针对曲线的标准偏差
那么如果截距b小于截距的标准偏差,那么就可以过原点,否则是不能原点
如table 1的例子,截距 b是0.8101,截距的标准偏差是0.5244,0.8101大于0.5244,是不能过原点,要选择方程y=0.9963x+0.8101
如果强制过原点,选择方程y=0.9975x,就会发现每个浓度点的偏差增大,尤其是低的浓度点,已经达到了45%的偏差。
所以线性要不要过原点,取决于截距接近原点的程度,如果截距小于一倍的截距标准偏差,就可以过原点 ,不然就不能过原点。如果强制过原点,就会造成浓度点偏差增大。1定量的方式
校准曲线的目的是为了准确的计算样品的含量,那么常用的定量方式有两种:外标法和内标法。
外标法比较简单,就是通过样品的面积和标样的面积相比较从而计算出样品的含量
而内标法是通过向标样中加入固定浓度的内标,计算内标和标样的比值从而计算出样品的含量,这两种方式的选择会在后面几期中写到。
2单点线性和两点线性
校准曲线的选择有很多,经常用到的是线性方程(Linear),如方程1:
y是峰面积,x是浓度,m是斜率,b是截距
如果过原点,就可以表示为方程2:
方程2经常用于单点线性,如果样品的浓度比较稳定,都是集中在某个浓度点附近,那么就可以选择一个浓度与样品浓度接近的标样,用单点线性定量。譬如医药产品某种物质含量的测定,这种物质的含量要求都是一致的,那么就可以用单点线性
方程2同样也可以用于两点线性,如果样品浓度范围比较窄,变化范围不超过一个数量级,那么就可以选择两点线性。
3多点线性
多点线性针对样品的溶度范围比较宽,Table 1的例子是一个多点线性,线性从1ng/ml到1000ng/ml,共10点
如果选择线性过原点,线性的方程是y=0.9975x,如果选择线性不过原点,线性的方程是y=0.9963x+0.8101
同时也给出了这两种方程下每个浓度点的偏差
4过原点还是不过原点
是否选择过原点就是选择要不要让截距b等于0,如果截距b接近原点,那么就可以选择过原点,这个接近程度该如何计算呢 ?
以table1为例,计算了截距b的标准偏差SD是0.5244,如tale2所示:
其中1.4134是针对曲线的标准偏差
那么如果截距b小于截距的标准偏差,那么就可以过原点,否则是不能原点
如table 1的例子,截距 b是0.8101,截距的标准偏差是0.5244,0.8101大于0.5244,是不能过原点,要选择方程y=0.9963x+0.8101
如果强制过原点,选择方程y=0.9975x,就会发现每个浓度点的偏差增大,尤其是低的浓度点,已经达到了45%的偏差。
所以线性要不要过原点,取决于截距接近原点的程度,如果截距小于一倍的截距标准偏差,就可以过原点 ,不然就不能过原点。如果强制过原点,就会造成浓度点偏差增大。
[div]导语
在实际测试中,会遇到很多关于校准曲线的问题:是外标法还是内标法?是单点线性还是多点线性?要不要过原点呢?线性的最低浓度应该是多少?诸如此类的问题,那么今天讨论一下:线性是否要过原点