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氨基酸浓度测定

Ins_7f8b4a9e

2024/01/25

液相色谱（LC）

各位大佬，我做氨基酸浓度测定，用的是异硫氰酸苯酯法，样品是以0.01mM的谷氨酸溶液为母液，梯度稀释25,50，100, 200， 400，然后取400微升标液，分别加入200微升的100mM异硫氰酸苯酯和1M三乙胺，室温放置衍生1小时，然后加入800ul的正己烷，震荡十分钟静置分层，然后取下清液过0.45μm的针式滤器进行检测，但是超出了紫外分光光度的测定上限，进行的是全扫描

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通标小菜鸟

第1楼2024/01/25

应助达人

楼主进样量是多大？如果超过检测器测定上限，拿建议减少进样体积或者加大稀释倍数，将曲线浓度配制的再低一点。

0

Ins_7f8b4a9e

第2楼2024/01/25

我先用紫外分光光度计测的
通标小菜鸟(v3141805) 发表:楼主进样量是多大？如果超过检测器测定上限，拿建议减少进样体积或者加大稀释倍数，将曲线浓度配制的再低一点。

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通标小菜鸟

第3楼2024/01/25

应助达人

紫外分光光度计测，那应该是浓度配置的太高了，样品颜色是什么样的？
Ins_7f8b4a9e(Ins_7f8b4a9e) 发表: 我先用紫外分光光度计测的

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有水有渝

第4楼2024/01/25

应助达人

直接用紫外分光光度检测好像不是标准方法吧，过量的衍生剂可能有干扰

0

ztyzb

第5楼2024/01/25

应助达人

楼主降低浓度试试，如果还不成线性就得用液相色谱了

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Ins_7f8b4a9e

第6楼2024/01/25

无色，您说的是衍生剂配的太高还是氨基酸的浓度
通标小菜鸟(v3141805) 发表:紫外分光光度计测，那应该是浓度配置的太高了，样品颜色是什么样的？

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Ins_7f8b4a9e

第7楼2024/01/25

对，我们没有测氨基酸的液相色谱柱，确实发现衍生剂有干扰了，异硫氰酸苯脂和三乙胺用紫外都能扫出来峰
有水有渝(xky0230699) 发表:直接用紫外分光光度检测好像不是标准方法吧，过量的衍生剂可能有干扰

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Ins_a369e43c

第8楼2024/01/29

傲骨铮铮誓言都

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Ins_9c9e5508

第9楼2024/01/29

棒。。。。。。。

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