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冰饼兵
2024/02/15
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前处理综合讨论
1.配置培养基和氯化钠的用水:小厂很多不具备纯水,用自来水是可以,基本不影响结果,微生物检测所有用水临时用自来水代替不影响结果。
2.灭菌锅是老式怎么办:看压力表,注意要放冷空气,前面把放气阀开着,当开始持续冒气后关掉,待压力表升到0.05的时候开启放气阀放掉全部气,冷空气基本就全部放完了。然后盯着压力表,待压力表升到0.13以上,最好不超付0.15的时候开始开启放气阀,压力回到0.12,不要低于0.10,时候关掉放气阀,持续过程25分钟以上,可保证灭菌彻底。时间再长点也不会影响培养基质量。灭菌完成后,不要马上卸压,关掉电源,让灭菌锅自己降温吧。当然万一时间赶,也可以直接卸压,不过可能会导致培养基喷出来。
3.可不可以不包牛皮纸:我比较懒,手工活也差,不会包牛皮纸。现在有石棉塞,塞好后,是可以不包牛皮纸的,石棉塞保护下,是可以隔绝外部细菌的。当然前提时,尽量减少在恶劣环境下久放。理想是灭菌完成后赶紧放在传递窗口里面。传递窗做好灭菌即可。
4.培养基和氯化钠浓度需要精确吗:我很懒,图快,氯化钠凭感觉配,0.7-1.2%之间,没多大影响。培养基,手抖多放了点,烧杯手抖,水多放了点,也没太大影响。当然此处不建议你们干,我是为了节约时间和试剂,手抖了总不能倒掉吧!
5.没有无菌操作台和无菌室怎么办:条件允许下,找一间没有人的房间,放一张干净的桌面,关闭窗户,提前一天用高浓度的84拖地擦洗,然后熏蒸。条件再允许就用臭氧熏蒸2小时以上,试验前再用酒精擦拭桌面,可以基本保证室内无菌,进房间前换好衣服,做实验动作轻点,可以保证实验是成功的。再不济就在试验台附近放一个酒精灯,但是注意不要太靠近,别把你实验的带菌烧死了。
6.大肠杆菌用哪个好:怎么说呢,我个人喜欢平板法。一般来说,比较的干净的产品,平板上不会有菌落,就可以直接报<10,不太干净的产品,平板上会有,经验多的,能肉眼看个七八成,不用做第二步验证就能猜测出来大肠杆菌的量。对于大部分企业来说,微生物是不需要知道具体的数值的,对于老板来说,只需要汇报,超标或没超标。另外条件比较差的情况下,大肠杆菌是可以直接在干净的室外倾倒平皿的。
7.器皿怎么灭菌:很多人喜欢干灭,原因可能是以前没有培养皿桶和移液管桶,用牛皮纸包着放恒温箱里面方便点。但是实际上,湿灭效果更好,而且花的时间更低。买一个培养皿不锈钢桶,将培养皿放入121度20分钟灭菌,胶头滴管放烧杯,牛皮纸封住,
移液枪
放桶或者牛皮纸包裹着,全部湿热。湿热后不用处理器皿上残留的水,不会影响结果。
8.没有恒温水浴锅怎么看培养基温度:可以用额温枪测温,一般温度为55度就可以开始实验了,等到了倾倒那一步,温度就差不多降到45度左右了。如果额温枪也没有,手摸,哈哈,握住不要放,能忍受就说明温度在50度以下,小姑娘的嫩手说明温度刚刚好。
9.怎么防止培养基喷出:先用烧杯加热,加热的过程中不断搅拌,当看到有泡沫出来,马上关火或者移开烧杯,待泡沫降下去再开启加热,然后重复之前动作2次,之后PCA就基本不会喷出了,PCA一般就是刚沸腾时容易喷出,前面关火降温让其不喷出,后面就不会再喷了。VRVA不一样啊,会一直喷,还很容易喷,所以沸腾好后改小火,快喷了就移开火源。
10.灭菌锅内怎么防止喷管:有人说,包牛皮纸,包紧点,但是我不喜欢包,也不用包。将生理盐水加热至沸腾然后马上塞胶塞,培养基也如此。试管内生理盐水用热水,保持瓶内管内有一定的负压即可。在加热前可以先将灭菌锅开着,让灭菌锅内的水也是热水,就行了。
11.培养室需要灭菌吗:有人喜欢一到晚上就把整个理化室灭菌灯开着,这样其实不好,紫外线会产生一定浓度的臭氧,臭氧可能会逸散到培养箱中影响正在培养的细菌,可能会影响结果。所以灭菌仅仅针对无菌室即可。培养箱一般来说,一月清洗一次,先用干净抹布擦拭,再用酒精擦拭一遍即可。
12.
移液枪
需要灭菌吗:不建议,容易老化
移液枪
。保证无菌室干净,
移液枪
带菌可以忽略。
13.无菌室灭菌:首选臭氧,其次84熏蒸,最后才是紫外线。
14.实验中最容易污染的因素:永远是手部,当接触试样之后,用酒精消毒一次。手部用于是最大的污染源。
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