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【我们不一YOUNG】新色谱柱如何活化,又如何保养
城头变幻大王骑
2024/07/16
私聊
液相色谱(LC)
色谱柱是高效
液相色谱仪
最主要的部件,被测物质能否被很好的分离和测定,色谱柱的性能起着决定性的作用。因此,在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养,以延长色谱柱的使用寿命。
01 色谱柱的活化
反相色谱柱:使用新的C18柱时,先用甲醇或乙腈冲洗20-30个柱体积,然后用甲醇/乙腈:水(50:50)冲洗10个柱体积,然后再用流动相平衡10-30柱体积。
正相色谱柱:新柱用流动相平衡20-30个柱体积。
离子色谱
柱(SAX, SCX):新柱先用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积,然后转换到流动相平衡。
部分品牌的氨基柱和氰基柱是保存在正相流动相中,用于反相色谱
时,先用异丙醇或乙醇冲洗色谱柱50-100个柱体积。
当用HILIC模式时,新柱用50倍柱体积50/50乙腈/水活化平衡,然后再用流动相平衡20个柱体积。
02 色谱柱的日常保存
反相柱:100%甲醇或乙腈保存。
正相柱:异丙醇或正己烷
保存。
离子交换柱
:100%甲醇,或大于40%的有机相保存。
切忌用缓冲盐保存色谱柱。
03 色谱柱的清洗和再生
反相C18色谱柱
清洗:每天柱子使用完后,立刻冲洗,如果使用缓冲液,必须先用相同比例的有机相/水冲洗20个柱体积,然后再转换到100%有机相冲洗20个柱体积。
再生:用100%水,甲醇,三氯甲烷,甲醇,100%水分别冲洗20个柱体积,在第一次用100%水时,进样5次200 μL二氯亚砜DMSO。
正相色谱柱
清洗:每次清洗都用低流速起步,当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂,如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。
再生:用四氢呋喃,甲醇,四氢呋喃,二氯甲烷,正己烷分别冲洗20个柱体积。
离子色谱
柱
清洗:用100%水冲洗30个柱体积去除盐,然后用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。
再生:先用高浓度盐的缓冲液清洗(浓度可以是5-10倍,不超过1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇清洗,再用50%乙腈或甲醇保存。
04 色谱柱日常使用保养
使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)
注意色谱的pH范围,大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-8
避免流动相组成及极性的剧烈变化
使用HPLC级试剂,流动相使用前必须经脱气和过滤处理
如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕将柱子冲洗干净并保存在乙腈中
压力升高是需要更换预柱的信号
确认流动相中缓冲盐的溶解性
确认样品在流动相中的溶解性
避免压力的突变
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