仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
样品前处理
>
前处理综合讨论
>
帖子详情
【我们不一YOUNG】+水源性致病微生物检测水样前处理方法之离心法
memory光阴
2024/07/18
私聊
前处理综合讨论
基于离心的前处理方法是利用离心力将大小、形状、密度和介质黏度不同的颗粒从液体介质中分离出来
,
是分子生物学实验室中最常用的技术之一
,
主要包括直接离心法和密度梯度离心法。
1
.直接离心法
直接离心法是直接对水中的微生物进行离心
,
通过将大部分微生物沉降于管底来达到分离及富集浓缩的目的。根据目标微生物的大小不同可选择不同的离心条件。原虫体积较大
,
直径
>3 μm,
选用的离心力一般为
500
~
2 000 g;
细菌直径一般为
0.5
~
10 μm,
常用的离心力为
3 000
~
12 000 g;
病毒直径一般为
0.01
~
0.1 μm,
常用的离心力为
90 800
~
171 000 g
。
Maal
等以
8 000 g
离心
10 min
后提取
DNA
的方法对伊朗伊斯法罕南部污水处理厂的进水水样进行大肠埃希氏菌菌株的分离鉴定。《生活饮用水标准检验方法
第
12
部分
:
微生物指标》
(GB/T5750.12—2023)
采用
Filta-MaxXpress
快速方法对饮用水中贾第鞭毛虫
/
隐孢子虫进行测定时
,
采用的分离条件是
2 000 g
离心
15 min
。
Ahmed
等对澳大利亚布里斯班某城市污水处理厂的进水水样进行小鼠肝炎病毒测定时采用的分离条件是以
100 000 g
在
4 ℃
下离心
1 h,
之后提取
RNA
并结合实时
q
PCR
(RT-q
PCR
)
完成检测
,
回收率为
33.5%±12.1%
。
直接离心法的优点主要体现在以下几个方面
:
①
方法成本只涉及离心机的初始投资
,
使用中不需要化学试剂或其他昂贵的消耗品
;
②
速度快
,
可以在相对较短的时间内完成大体积水样的处理
;
③
方法操作简单、技术要求低
,
操作过程中不会引入其他物质、试剂
,
对目标微生物影响较小。然而
,
直接离心法也存在不足之处
:
①
在富集目标微生物的同时会对其他颗粒进行富集
,
特别是对于浑浊度高的水样
,
容易对后续操作
(
如核酸提取、
PCR
检测等
)
造成影响
;
②
离心后倾倒上清液时易造成目标微生物损失。
2.
密度梯度离心法
密度梯度离心法是用一定的惰性介质
(
蔗糖、甘油等
)
在离心管内形成连续或不连续的密度梯度
,
根据微生物在密度梯度液中的比重不同
,
通过离心力的作用使目标微生物分离的一种技术。
Garrison
等在弗吉尼亚州诺福克的拉斐特河和海湾流淌的水中加入大肠埃希氏菌和鞭毛虫后
,
采用蔗糖密度梯度离心法实现了对两种微生物的富集。
Chesnot
等采用不同惰性介质的密度梯度离心法实现了浑浊水样中隐孢子虫卵囊的富集
,
已发布的
GB/T 5750.12—2023
中两虫检测也新增了密度梯度法。
Hinzke
等使用蔗糖密度梯度离心法根据微生物大小从海水中富集了细菌共生体。
密度梯度离心法的优点是
:
①
分离效果好
,
可一次获得杂质较少的目标微生物
;
②
适用范围广
,
既能分离沉降系数不同的颗粒
,
又能分离密度不同的颗粒。该法存在的局限性是
:
①
成本昂贵
;
②
需要制备惰性介质溶液
;
③
操作复杂
,
不易掌握。
相关话题
1
【我们不一YOUNG】+水源性致病微生物检测水样前处理方法之过滤法
2
【我们不一YOUNG】+水源性致病微生物检测水样前处理方法之磁性分离法
3
【我们不一YOUNG】+GPC 凝胶净化系统能做什么?
4
【我们不一YOUNG】+多种前处理手段的联用
5
【我们不一YOUNG】+样品前处理的作用
近期热榜
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
【中秋佳节】 在一起月更圆!
一个“不符合”难住新领导
第三届微课大赛投票进行中ing
热门活动
第三届微课大赛投票进行中ing
【仪采通】仪器采购更轻松
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】生物大分子(蛋白,淀粉,核酸)的降解
2007/04/02
封闭电炉和电热板有什么区别?
讨论
2011/09/12
【讨论】测定泥岩有机炭含量前的研磨情况
2007/05/13
超声提取产热对试验结果有多大影响?
求助
2016/09/06
安捷伦7697A顶空进样器
讨论
2020/08/27
针筒式过滤器
原创
2011/09/26
【求助】请问Tessier 连续提取法 具体内容是什么
2007/03/25
【求购】请问哪里有卖超临界萃取卖,比较小,便宜的
2009/09/09
【金秋计划】用 HJ586-2010 方法测定游离余氯的标准曲线不成线性怎么办?
分享
2024/09/10
【金秋计划】水质余氯检测用哪个方法?
分享
2024/09/10
【金秋计划】浊度与其他指标的联系与影响有哪些?
分享
2024/09/10
【金秋计划】+水质总氮的测定碱性过硫酸钾法中的空白总是很高怎么办?
分享
2024/09/10
【金秋计划】+氨氮用蒸馏法除干扰后,显色了又马上褪色是怎么回事,要怎么除干扰?
分享
2024/09/10
【金秋计划】+纳氏试剂法测定氨氮,有哪些注意事项?
讨论
2024/09/10
【金秋计划】+纳氏试剂测生活饮用水氨氮,为何向过滤后的水样中加入酒石酸钾钠,下面有白色沉淀,水样中有悬浮物,吸光度一直变。用混凝沉淀的方法,吸光度还是一直变。而标准曲线则无此现象?
讨论
2024/09/10
【金秋计划】+为什么总氮的检测结果比氨氮低很多?
分享
2024/09/10
赛默飞气相TRACE1300 FPD检测器上出现结晶颗粒物是怎么原因?
求助
2024/09/10
维氏硬度计的日常检查如何获得压痕参考值?
求助
2024/09/10
原子吸收火焰法测定土壤中六价铬所用质控样值一直在衰减
求助
2024/09/12
进入化学实验室为什么要禁止化妆?
分享
2024/09/09
扫描电镜的使用对于怀孕前三个月的危害
已应助
2024/09/08
各类地方标准、团标的查找路径
求助
2024/09/09
数据和结果
求助
2024/09/11
高分辨液质选择
已应助
2024/09/09
【我们不一YOUNG】+水源性致病微生物检测水样前处理方法之富集培养法
分享
2024/07/18
【我们不一YOUNG】+天平操作使用前的注意事项
原创
2024/07/18
【我们不一YOUNG】+水中有机物测定预处理方法总结
原创
2024/07/18
阳虚体质如何调理
原创
2024/07/18
【我们不一YOUNG】+水质前处理之样品萃取技术
原创
2024/07/18
【我们不一YOUNG】+水质前处理之样品消解技术
原创
2024/07/18
【我们不一YOUNG】+水质前处理之分离和富集技术
原创
2024/07/18
【我们不一YOUNG】+新手教学,如何利用气相色谱绘制校正曲线?
原创
2024/07/18
品牌合作伙伴
研究月球土壤岛津助力郑大用户登Nature顶刊
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...