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【我们不一YOUNG】孢子菌悬液制作方法

城头变幻大王骑

2024/07/27

食品毒素/微生物检测

1. 菌种活化

将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中，培养7d～14d，使生成大量孢子。未制备孢子悬液时，不得拔去棉塞。每打开1支只供制备1次悬液，每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。

2. 孢子悬液制备

在上述PDA斜面培养基中加入少量无菌蒸馏水，用无菌接种环轻轻刮取表面的新鲜霉菌孢子，将孢子悬液置于250mL锥形瓶内，然后注入40mL洗脱液。

锥形瓶中加入直径5mm的玻璃珠10粒～15粒与孢子混合，具塞后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开，然后用单层棉纱布过滤以除去菌丝。将其装入灭菌离心管中，用离心机分离沉淀孢子，去上清液。再加入40mL洗脱液，重复离心操作3次。制成浓度为(0.8～1.2)×106spores/mL的霉菌孢子悬液。若需要精确计数，则可以用改良察氏液体培养基稀释孢子悬液，用血球计数板计数。孢子悬液应在当天使用，若不在当天使用应在 3℃～7℃保存，并尽量在4d内使用。

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