仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
色谱
>
液相色谱(LC)
>
帖子详情
高效液相色谱技能篇|关于内标法的小知识
p3203140
2024/09/08
私聊
液相色谱(LC)
内标法是通过向样品中添加一种已知量的内标物质,与待测组分一同进行色谱分析,利用二者的峰面积或峰高比值来定量测定样品中待测组分的含量,从而补偿样品制备和分析过程中的变异,提高分析结果的准确性和精密度。
01.中国药典中的内标法(2025版的公示稿)
1)
内标法的一般步骤:
(可以理解为
内
标单点法)
a.精密称(量)取对照品和内标物质,分别配成溶液;
b.精密量取各适量,混合配成校正因子测定用的对照溶液;
c.精密量取适量进样,记录色谱图;
d.测量对照品和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算校正因子:
f.再精密量取各品种项下含有内标物质的供试品溶液适量,进样,记录色谱图;
g.测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高,按下式计算含量:
2)
对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系,可以采用
内
标标准曲线法
进行含量测定。
a.精密称取对照品(或工作对照品)适量,或精密量取对照品储备液适量,与精密量取的内标溶液混合,配成含等量内标物的不同浓度待测成分的系列溶液,
b.精密量取系列溶液各适量,进样,记录色谱图,
c.测量待测成分和内标物的峰响应比值,用峰响应比值(或经转换)对待测成分浓度绘制标准曲线,通过最小二乘法计算出回归曲线方程。
d.在相同的色谱条件下,再精密量取加有与对照品系列溶
液相
同量内标物的供试品溶液,进样,记录色谱图,
e.测量供试品溶液中待测成分和内标物的色谱峰响应比值,由待测成分的峰响应比值(或经转换)和回归曲线方程确定供试品溶液中待测成分的量。
02.欧洲药典中的内标法
1)使用校准函数的多点校准:
a.选择一个稳定的内标物质,其保留时间应接近待测组分,并且其峰应与色谱图中所有其他峰良好分离。
b.制备一系列含有固定量内标和不同梯度浓度对照品的参考溶液。
c.注入固定体积的各个参考溶液,记录色谱图,并计算对照品与内标峰面积或峰高的比例。
d.绘制校准曲线,横坐标是对照品的量(或对照品与内标量的比值),纵坐标是峰面积或峰高的比例。
e.
通常通过线性回归得到校准函数。
f.制备含有与校准函数制备中相同量内标的待测样品溶液,并在相同色谱条件下分析,计算待测组分与内标的比例,通过校准函数读取或计算组分的含量。
2)单点校准:
a.在各论中,选择一个浓度在校准曲线线性范围内的对照品溶液,以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液(两者都含有固定量的内标)。
b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的峰面积或峰高比例来定量分析组分的含量
图1.欧洲药典内标法原文
03.美国药典中的内标法
1)使用校准函数的多点校准:
a.选择一个稳定的内标物质,其保留时间应接近待测组分,并且其峰应与色谱图中所有其他峰良好分离。
b.制备一系列含有固定量内标和不同梯度浓度对照品的参考溶液。
c.注入固定体积的各个参考溶液,记录色谱图,并计算对照品与内标峰面积或峰高的比例。
d.绘制校准曲线,横坐标是对照品的量(或对照品与内标量的比值),纵坐标是峰面积或峰高的比例。
e.通常通过线性回归得到校准函数。
f.制备含有与校准函数制备中相同量内标的待测样品溶液,并在相同色谱条件下分析,计算待测组分与内标的比例,通过校准函数读取或计算组分的含量。
2)单点校准:
a.在各论中,选择一个浓度在校准曲线线性范围内的对照品溶液,以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液(两者都含有固定量的内标)。
b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的峰面积或峰高比例来定量分析组分的含量。
3)标准化程序:
如果已经证明峰的线性关系,个别各论可能会规定通过测定相应峰的面积占所有峰总面积的百分比(不包括溶剂、试剂或流动相或样品基质引起的峰,以及忽略限或报告阈下的峰)来计算待测组分的百分比含量。
图2.美国药典内标法原文
对三国药典进行总结一下:
1)共同点:
三种药典都强调了内标物的选择标准,即内标物应稳定,其保留时间应接近待测组分,并且其峰应与色谱图中所有其他峰良好分离。
都采用了校准曲线的方法来定量分析,无论是通过多点校准还是单点校准。
都涉及到了通过测量峰面积或峰高来计算校正因子和待测组分的含量。
2)差异点:
中国药典在公示稿中没有详细描述单点校准(但一般可以默认最开始的是单点校准法)和标准化程序;
欧洲药典和美国药典都明确区分了多点校准和单点校准,并且美国药典提供了标准化程序的描述,允许在特定条件下通过峰面积百分比来计算含量。
相关话题
1
高效液相色谱技能篇|关于定性分析的小知识
2
【金秋计划】+液相色谱中影响峰扩散的有那些因素?与气相色谱相比,有哪些不同之处?
3
【金秋计划】+pH值不同出峰时间不同,具体原理是什么?除了pH值会影响,还有其他因素吗?
4
【金秋计划】+现在用液相色谱做含量测定时,保留时间太长,20分钟左右才出峰,有没 什么方法提前,原理是什么?
5
【金秋计划】+检测二氯喹啉酸残留,色谱条件:流动相为乙腈:水(V/V)=1:1,水用磷酸调到pH=4;流速1mL/min;波长225nm;进样量20μL。此条件下,标样出峰时间较早,保留时间4min左右,样品峰分不开。调整了流动相比例,乙腈:水(V/V)=1:3,保留时间15min左右,但峰高和峰面积明显降低,且浓度较低时不出峰,怎样解决?
近期热榜
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
【中秋佳节】 在一起月更圆!
一个“不符合”难住新领导
第三届微课大赛投票进行中ing
热门活动
第三届微课大赛投票进行中ing
【仪采通】仪器采购更轻松
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】agilent 1100 D通道进了很多空气该怎么处理
2007/04/19
lc进样量
求助
2012/09/09
【求助】Agilent 1200
2007/12/11
高效液相色谱HPLC培训教程(经典)
分享
2013/05/20
梯度洗脱基线漂移
求助
2019/09/25
waters 柱温箱怎么装啊
已应助
2022/11/03
【求助】分离番茄红素和类胡萝卜素应该选择什么样的柱子?
2011/01/29
【求助】哪里能下载甲醇标准啊?
2007/09/16
岛津2030进样针位置不对
原创
2024/09/16
【金秋计划】液相色谱不出峰的可能原因
分享
2024/09/14
【金秋计划】液相色谱进样针、针座漏液的可能原因
分享
2024/09/14
【金秋计划】液相色谱进样器使用注意事项
分享
2024/09/14
【金秋计划】液相色谱峰重现性不好的原因
分享
2024/09/14
【金秋计划】液相色谱峰分叉的原因
分享
2024/09/14
【金秋计划】使用RID检测器的注意事项
分享
2024/09/14
【金秋计划】使用液相泵的注意事项
原创
2024/09/14
赛默飞气相TRACE1300 FPD检测器上出现结晶颗粒物是怎么原因?
求助
2024/09/10
【金秋计划】当没有合适的基质时可以用标准加入法来试试看
第十七届原创
2024/09/13
维氏硬度计的日常检查如何获得压痕参考值?
求助
2024/09/10
原子吸收火焰法测定土壤中六价铬所用质控样值一直在衰减
求助
2024/09/12
数据和结果
求助
2024/09/11
基线(随机出现)突跃有哪些原因?
求助
2024/09/12
液质有什么好项目可以做
讨论
2024/09/11
关气瓶是先关总阀还是先关减压阀?
求助
2024/09/14
如何正确的安装、老化及储存色谱柱?
分享
2024/09/08
。。。。。。
分享
2024/09/08
高效液相色谱技能篇|关于加校正因子对照法的小知识(欧洲药典及欧洲药典质量标准的起草技术指南 )
分享
2024/09/08
高效液相色谱技能篇|关于加校正因子对照法的小知识(中国药典)
分享
2024/09/08
【金秋计划】平行样品水分检测不平行问题
分享
2024/09/08
薄层色谱的原理?困扰我好就了这个问题,不明白
原创
2024/09/08
液相色谱检测原理?希望大神来解答下谢谢了
原创
2024/09/08
液相色谱质谱联用仪原理是什么呀,有知道的吗?
原创
2024/09/08
品牌合作伙伴
研究月球土壤岛津助力郑大用户登Nature顶刊
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...