【金秋计划】基于特定靶点的中药活性成分筛选策略

白芍（Radix paeoniae alba，RPA）具有抗炎作用，已被报道可以抑制细胞增殖和促炎细胞因子（TNF-α、IL-1等）的产生。然而，目前对RPΑ的抗炎机制以及其药理作用的潜在活性成分和直接结合的靶蛋白知之甚少。由于TNF-α通过肿瘤坏死因子受体1（TNF-R1）信号通路在炎症反应中发挥作用，对RPΑ中与TNF-R1结合的活性成分进行确认有助于理解RPΑ抗炎作用。基于表面等离子体共振（SPR）的中药主要活性成分筛选策略，以中药白芍为例，确定了其中能够特异性结合TNF-R1进而发挥抗炎作用的化合物。表面等离子体共振（SPR）是药物发现中的经典工具，可以同时提供分子相互作用的动力学和平衡特性，而UPLC-QTOF/MS是对中药成分进行定性和定量分析的有力工具，SPR与UPLC-QTOF/MS系统相结合可以筛选与特定蛋白直接结合的活性成分。

4、白芍中与TNF-R1结合的小分子的功能验证作者最后采用细胞活力和凋亡分析通常用于评估两种小分子的的抗炎作用。结果显示TNF-α和Act-D对L929细胞产生近70%的细胞毒性，而芍药苷和丹皮酚以剂量依赖性方式抑制细胞毒性此外，研究发现经TNF-a和Act-D处理后，细胞凋亡水平显著升高至60.02%，20 mM芍药苷的诱导率为22.31%，丹皮酚治疗组也有类似的抑制作用（图7）。细胞活力和凋亡结果表明，这两种生物活性候选物干扰了TNF-a的生物活性，可能在RPA的抗炎活性中发挥重要作用。