仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
评论
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
药物检测
>
中药/天然药检测
>
帖子详情
【金秋计划】藤黄酸靶向USP2诱导KRAS泛素化降解治疗多发性骨髓瘤
城头变幻大王骑
2024/09/10
私聊
中药/天然药检测
1
、
GA
诱导
KRAS
降解
作者首先通过筛选了一个自制的化合物库,用含有
KRAS
G12A
突变的
MM
细胞系
MM.1S
和
RPMI 8226
鉴定可以降低
KRAS
水平的化合物,发现藤黄酸(
Gambogic acid
,
GA
,)处理可降低两种细胞系中
KRAS
的水平,而其他化合物没有表现出相似或较弱的效果。进一步实验表明,
GA
可以以浓度和时间依赖性方式降低两种细胞系中
KRAS
的水平,以及
KRAS
的下游
p-ERK
(
MAPK
通路)和
p-AKT
(
PI3K
通路)。此外,
q
PCR
显示
GA
不会改变
KRAS
的转录水平,表明
GA
可能在转录后水平降低
KRAS
。
进一步使用蛋白酶体抑制剂
MG132
发现
MG132
部分挽救了
GA
诱导的
KRAS
蛋白下调,表明
KRAS
蛋白降解与泛素
-
蛋白酶体途径有关,此外,我们采用放线菌酮(
CHX
)测定评估显示
GA
处理后,
KRAS
的半衰期显著缩短。这些数据表明
GA
可以诱导
KRAS
的蛋白酶体降解,进而损害
MM
细胞中的下游信号转导
2、鉴定USP2作为GA的新靶标
为了确定GA诱导KRAS降解的靶标,作者合成了生物素标记的GA,发现它保留了在MM细胞中诱导KRAS降解的能力,进一步利用该探针开展Pulldown+MS,鉴定到的互作蛋白中,HSP90和USP2这两种与蛋白质降解相关。HSP90是一个已知的GA靶点,作为伴侣蛋白,它可以调节各种蛋白的稳定性,然而HSP90抑制剂STA9090处理不能降低MM.1S细胞中KRAS的蛋白水平,表明KRAS不是 HSP90的底物。因此,作者更加关注USP2,一种新型的GA互作蛋白。通过Pulldown+WB、免疫荧光共定位、竞争实验、CETSA、DARTS实验共同证实了USP2是GA的直接相互作用蛋白。此外,GA在体外相对特异性地抑制USP2的去泛素化活性(
3、半胱氨酸284对于GA与USP2的共价结合至关重要
然后,作者研究了GA和USP2之间的相互作用模式,发现碘乙酸(IAA,一种半胱氨酸烷化剂)与USP2的预孵育完全抑制了GA与USP2的结合,表明GA可能与USP2的半胱氨酸共价结合,这与之前的报道一致,即GA可以通过半胱氨酸残基与其靶标共价结合。接着,通过USP2蛋白与GA一起孵育后质谱鉴定,发现Cys284残基被GA共价修饰。此外,通过构建USP2的两个突变体(C276S、C284S),发现GA 与 USP2(C276S)结合,而不是USP2(C284S),表明GA可以与USP2的Cys284残基特异性形成共价键。结合动力学显示GA 以剂量和时间依赖性方式与 USP2 共价结合,分子对接显示P565和 R289对于形成GA与USP2结合的口袋至关重要。同样通过蛋白点突变实验发现P565 和 R289对GA-USP2相互作用至关重要
4、USP2调节KRAS的稳定性
前面发现GA降低MM细胞中KRAS蛋白水平并抑制USP2活性,表明USP2可能调节KRAS的稳定性。作者利用CRISPR/Cas9敲除MM.1S和RPMI 8226细胞系中的USP2,发现敲除USP2导致KRAS蛋白水平降低,mRNA水平不变, KRAS的下游效应子p-ERK水平也显著降低。此外,敲除诱导的KRAS下调可被两种细胞系中的蛋白酶体抑制剂MG132挽救。结果表明USP2可以增强KRAS的蛋白质稳定性。进一步研究发现USP2与KRAS互作并使KRAS去泛素化,表明KRAS是USP2的底物
5、USP2敲除抑制MM细胞的增殖
鉴于KRAS在MM细胞增殖和存活中的关键作用,作者假设USP2敲除可能会使KRAS不稳定,从而导致MM细胞增殖抑制。结果显示USP2敲除显著抑制MM.1S和RPMI 8226细胞系的增殖,诱导这两种MM细胞系凋亡。此外,MM.1S 细胞的异种移植 MM 模型发现,USP2敲除显著抑制肿瘤生长,免疫组化染色也显示USP2敲除组的KRAS水平降低,这些数据共同表明USP2在MM细胞的增殖和存活中起着关键作用
6、GA通过靶向USP2和破坏KRAS的稳定性来诱导MM细胞凋亡
据报道,GA通过抑制PI3K/Akt/mTOR、
NF-κ
B 和其他信号通路诱导MM细胞凋亡。作者发现GA处理可以以剂量依赖性方式降低MM.1S和RPMI 8226细胞的活力并促进细胞凋亡。此外,过表达USP2的细胞对GA诱导的活力降低和KRAS降解表现出部分抗性,且GA处理可以提高 KRAS的泛素化水平。KRAS
G12C
的过表达可以部分消除USP2敲除诱导的细胞生长抑制。这些数据表明,GA在 MM 细胞中诱导的细胞毒性至少部分归因于其靶向USP2,这降低了KRAS的稳定性。
最后,作者探讨了USP2在MM中的临床意义。通过GSE13591数据集发现MM患者骨髓样本中的USP2 mRNA水平明显更高。此外,作者发现原发性骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞系中USP2的蛋白水平高于正常外周血单核细胞(PBMC)和正常骨髓活检,且高USP2水平的MM患者的总生存期降低,这些结果共同表明USP2表达增加与MM中较差的结局之间存在很强的相关性,表明USP2可能是MM治疗的有前途的靶点。
相关话题
1
【金秋计划】柴芩承气汤缓解高甘油三酯血症相关的急性胰腺炎的作用及机制
2
【金秋计划】黄精多糖的结构特征及其靶向MD2蛋白发挥巨噬细胞免疫调节活性
3
【金秋计划】中药火麻仁治疗特应性皮炎的活性成分及机制
4
【金秋计划】葛根素增强SIRT5去琥珀酰化酶活性缓解急性肝损伤后的线粒体氧化应激
5
【金秋计划】人参皂苷Rg3靶向GRB2恢复线粒体心磷脂稳态预防帕金森病
近期热榜
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
【中秋佳节】 在一起月更圆!
一个“不符合”难住新领导
第三届微课大赛投票进行中ing
热门活动
第三届微课大赛投票进行中ing
【仪采通】仪器采购更轻松
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【讨论】药品检验板块答谢贴!每人10分)
2009/10/19
【资料】栽培与野生丹参的红外光谱三级鉴定研究
2010/09/27
铅能起到增白作用看来很早就有了。
讨论
2013/10/31
移液器的使用与维护
分享
2012/03/29
什么是“荔枝病”
原创
2024/06/08
来说说“狗”药种种
分享
2013/01/25
【有奖参与活动】可以互相取代吗?
2010/06/11
中药学!学!学!(二)
讨论
2011/11/15
中药颗粒剂的如何质量控制?
第十七届原创
2024/09/18
桃核承气汤激活Nrf2抑制铁死亡改善脓毒症所致心功能障碍
分享
2024/09/18
七叶苷激活Nrf2/GPX4通路抑制铁死亡治疗肝纤维化
分享
2024/09/18
白头翁皂苷B4衍生物靶向丙酮酸羧化酶改善结肠炎
分享
2024/09/18
当归中发现有效抗骨质疏松分子及化学全合成
分享
2024/09/18
青蒿素衍生物靶向脂质代谢关键蛋白诱导铁死亡
分享
2024/09/18
黄芪甲苷III靶向激活RXRa改善心力衰竭
分享
2024/09/18
益母草碱缓解情志应激导致的帕金森病“易感性”
分享
2024/09/18
【金秋计划】当没有合适的基质时可以用标准加入法来试试看
第十七届原创
2024/09/13
原子吸收火焰法测定土壤中六价铬所用质控样值一直在衰减
求助
2024/09/12
关气瓶是先关总阀还是先关减压阀?
求助
2024/09/14
基线(随机出现)突跃有哪些原因?
求助
2024/09/12
数据和结果
求助
2024/09/11
液质有什么好项目可以做
讨论
2024/09/11
委托加工,条形码到底该用谁的?
求助
2024/09/13
恒温振荡器如何校准?
已应助
2024/09/13
【金秋计划】+纳氏试剂测生活饮用水氨氮,为何向过滤后的水样中加入酒石酸钾钠,下面有白色沉淀,水样中有悬浮物,吸光度一直变。用混凝沉淀的方法,吸光度还是一直变。而标准曲线则无此现象?
讨论
2024/09/10
【金秋计划】人参皂苷Rb1靶向QKI蛋白抑制巨噬细胞激活防止结直肠癌肝转移
分享
2024/09/10
【金秋计划】+为什么总氮的检测结果比氨氮低很多?
分享
2024/09/10
【金秋计划】+氨氮蒸馏过程如何操作?
分享
2024/09/10
【金秋计划】基于特定靶点的中药活性成分筛选策略
分享
2024/09/10
【金秋计划】+如何解决氟离子电极测定时,斜率偏低的问题?
分享
2024/09/10
【金秋计划】雷公藤红素靶向COMMD3/8复合物抑制自身免疫病
分享
2024/09/10
【金秋计划】+水质氟化物的测定中,使用离子电极选择法的注意事项是什么?
分享
2024/09/10
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...