有机相比例越低，峰反而更分不开了是为啥？

应助达人

三个峰很近，说明性质相近，建议降低流速或柱温试试，流动相就要65%那个

应助达人

楼主，其实65%乙腈、60%乙腈、50%乙腈条件下，三个峰的分离度是差不多的，你可以仔细观察。之所以看上去65%乙腈峰看上去好看，并不是因为三个峰分离了，而是峰高更高，更尖锐造成的，峰谷那块依然没有分离开。从65%乙腈到50%乙腈，峰高降低，峰宽变宽，峰更塌了，所以看上去像分离度变差了。建议楼主还是延用65%乙腈，另外还请楼主把其它色谱参数发上来，比如洗脱程序，柱子尺寸型号，还有柱温等等。

应助达人

您分析的是什么物质？什么柱子？这种情况下调一下流动相的酸碱性看看，再一个换个不同差异性大的色谱柱看看。

应助达人

可以走梯度试试。

感谢大佬，我是等梯度洗脱的，也就是65%-65%洗脱30分钟这样子，柱子是常规C18 ods柱，250mm×4.6mm×5μm，柱温设置的是35摄氏度。
您提到的分离度差不多的情况，我也观察到了，很明显地在有机相比例降低之后，峰变塌了，但为什么在相同进样量的情况会出现这种情况呢？求大佬解答

感谢感谢，三个峰确实是同一类物质，只是取代基位置不同，我现在的流速是1.0流速，再往下降的话，是要降到0.8或者0.5吗？

分析的是萜类化合物，三个峰性质相近，应该就是取代基位置不同。因为是中性物质，所以没有考虑调流动相的酸碱性。柱子用的是5微米的C18柱，我们实验室只有C18和C8这两种柱子，是需要用C8的柱子试一下吗？