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EP11 Hydroxyethylis salicylas的液相色谱梯度检测方法于30min开始出现波动并出现杂峰

礼夏

2024/09/18

液相色谱（LC）

这是梯度方法与条件

仪器是安捷伦1260，自动进样

这是目标物：水杨酸乙二醇酯

这是三种杂质，其中水杨酸（杂质A）使用液相外标，乙二醇（杂质B）使用薄层色谱，杂质C以及其他杂质使用自身

但是现在产生了一个不在ABC列内的杂质，这里命名为杂质D，结构式如下

这个杂质刚好出现在30分钟存在杂峰的位置，自身对照本身峰面积比较小，虽然可以去除溶剂进样的背景值，但我认为这样肯定是不准确的。
于是就做了以下工作：

1.怀疑醋酸铵：直接不加，30分钟仍存在杂峰
2.怀疑四氢呋喃：检查发现使用的四氢呋喃含有稳定剂，故更换成无稳定剂，依旧变化不大，存在杂峰
3.查资料：仪器信息网有朋友说可能是前面水比例大，梯度洗脱下乙腈内的杂质逐渐在柱内保留，最后在乙腈比例上去之后一口气洗脱出来，导致30-40分钟有大量杂峰并且影响基线。

在第三条的基础上进行梯度优化

1.由于原来出峰在梯度变化的位置，怕比例阀不稳定于是将15-35（5-80乙腈）改成15-30（5-60乙腈）并且以这个乙腈比例稳定15分钟，期望基线稳定一些，并且期待60的乙腈杂峰无法洗脱出来
结果：杂峰还是存在，基线仍然有波动，不过目标物勉强有和杂峰分离的迹象。
2.将15-30（5-60乙腈）改成15-30（5-50乙腈）
结果：杂峰仍然存在，基线仍有波动，不过目标物和杂峰有足够高的分离度，在去除背景值后基本重复进样峰面积稳定，勉强能达到中控要求

因为乙腈的浓度降低了很多，柱内肯定会残留一些东西，于是在45min之后将乙腈升至85，稳定至无峰出现，最后得到一个勉勉强强的梯度。以下是30min后的几个

进无稳定剂的四氢呋喃

进供试品加表杂质D（图中的加标双酯）

进供试品，未去除进溶剂四氢呋喃空白图

进供试品，去除进溶剂四氢呋喃空白图

目前非常急切想请教各位老师的几个问题：

1.这些杂峰是否是HPLC乙腈生产中不可避免的杂质，在液相中有没有办法避免
2.自身对照法中，如果EP11中未指明的杂质，比如我这个杂质D，不做方法验证可以和杂质C一样计算限度吗，还是需要做一下校正因子

附件：

Hydroxyethyl salicylate--欧洲药典11.0--水杨酸乙二醇酯.pdf

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