仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >色谱 > 液相色谱（LC） > 帖子详情

高效液相色谱基础篇|关于反相色谱柱维护保养及注意事项小知识

p3203140

2024/09/30

液相色谱（LC）

承接上回，我们说了一下反相色谱柱的原理、构造、分离机制及使用过程中的影响因素，今天主要说说它的维护保养和相关的注意事项，色谱柱固有一死，但好的操作还是能延缓它的生命周期的。

01.反相色谱柱的维护

1）新柱活化：新色谱柱首次使用前，通常需要用纯有机溶剂（如甲醇或乙腈）冲洗，以去除可能残留的其他杂质。

2）流动相和样品的清洁：确保流动相和样品无颗粒物和微生物污染，以避免堵塞色谱柱。使用HPLC级溶剂，并在必要时过滤流动相和样品。

3）使用保护柱：在色谱柱前加装保护柱，可以有效防止颗粒物进入分析柱，延长其使用寿命。

4）柱子的保存：短期内不使用时，应将色谱柱保存在高比例的有机相中，如甲醇或乙腈。长期不使用时，应按照制造商的推荐条件保存，并确保柱子两端密封，避免溶剂挥发。

5）避免长时间未使用：如果色谱柱长时间不使用（超过6个月以上不用时），应定期用适当的溶剂冲洗，以防止固定相的流失或柱床的干涸；如果使用缓冲盐，分析结束后应先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗。

6）避免长时间压力变化：避免频繁地改变流速或压力，以防止柱床压缩或损坏。

7）柱温的控制：不要超过色谱柱的最高使用温度，以避免填料退化。

8）定期柱效测试：定期进行柱效测试，记录塔板数与压力，监控色谱柱的性能变化。（仅供参考，一般柱效测的物质都是小分子，如果是蛋白药物的检测没有参考意义，有可能已经拖尾或者分离度变差了，但柱效依然可以。）

02.反相色谱柱的注意事项

1）pH值限制：由于大多数RPC使用硅胶作为基质，应避免在pH值低于2或高于7.5的环境中使用，以防硅胶溶解或键合相水解。（不过现在有些厂家的反相色谱柱可以做到2~11，但还是不推荐大家极限使用）

2）流动相组成：确保流动相的组成与色谱柱兼容，避免使用会与色谱柱发生反应或沉淀的溶剂。

3）样品兼容性：确保样品溶剂与流动相兼容，避免样品中的溶剂在色谱柱中沉淀或与固定相发生不可逆吸附。

4）样品纯度：样品应尽可能纯净，以避免污染色谱柱。建议使用0.22μm或更小孔径的过滤器过滤样品。

5）避免颗粒物：防止颗粒物进入色谱柱，这可能会损坏固定相或堵塞柱筛板。

6）柱压监测：定期检查柱压，异常的柱压升高可能是由于样品或流动相中的颗粒物、色谱柱损坏或其他问题。

7）避免极端温度：不要将色谱柱暴露在极端温度下，这可能会损坏固定相或改变其性能。

8）记录使用情况：记录色谱柱的使用情况，包括使用针数、理论塔板数、分离度、拖尾因子等，有助于追踪色谱柱的性能变化。

9）柱子更换：当色谱柱性能下降，如出现峰形变宽、分辨率降低或重现性差时，应及时更换色谱柱。（柱子再生一般效果微弱，色谱柱如果价格不高的话，不推荐此操作。）

总结一下：简单来说，维护反相色谱柱就像照顾一位挑剔的朋友：新柱到手，先用纯有机溶剂好好洗个澡，去除杂质。使用时，确保流动相和样品都干干净净，避免颗粒物和微生物的污染。如果样品比较脏或者流动相不够纯，别忘了在前面加个保护柱，这样能防止颗粒物伤害你的色谱柱。不用的时候，记得保存在合适的溶剂中，别让它干涸或受潮。使用过程中，避免频繁改变流速和压力，也别让它经历极端的温度变化。定期检查一下它的“健康”，比如柱压和柱效，这样你就能及时发现问题，及时处理。最后，如果它真的表现不佳了，也别勉强，及时更换新的色谱柱，以免影响你的实验结果。

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

丹纳赫苏州基地打工人的梦想

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...